[发明专利]一种新的多肽——补体Clr78.76和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——补体Clr78.76，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

Clr是一种丝氨酸蛋白酶的酶原，它是激活补体系统的经典路径的首要因素。凝血丝氨酸蛋白酶参与了血液的凝结，纤维蛋白的溶解，及补体激活等多种生理过程。它们在凝血过程中以单链或双链行式出现，仅仅被特殊的限量蛋白水解的卵裂激活。丝氨酸蛋白酶的接触反应链中大部分结构差别不大。(StevenP.Leytus，Kotoky Kurachi，Biochemistry 1986，25，4855-4863)

人类的Clr的cDNA序列已经从人的肝脏和Hep G2细胞的Poly(A)RNA反转录得到。通过DNA序列分析，不包括Poly(A)，cDNA含有2493个Clr RNA的核苷酸。Clr的cDNA序列包括一个5′的非编码区域，由2115核苷酸编码的705氨基酸的多肽前体，以及一个3′非编码区域。Clr的poly(A)或非编码的链是前体分子的氨基末端的起源，包括一个蛋白生长因子区域和两个不同的内在重复对。其中一对和Clr氨基末端序列紧密相关，另一对是和β₂-糖蛋白酶I，补体因子B，细胞因子VIII的b单元以及触珠蛋白α¹链单一区域中前后重复呈现的表达是同源的。Clr的B链是酶触反应的一部分而且和丝氨酸蛋白酶的胰岛素家族是同源的。(Christman et al，1977；Collen，1980)

补体Clr是三种特殊的糖蛋白之一，包含了经典激活补体路径的首要因素。识别单位Cl包含了Clq，Clr，Cls。Clq和补体结合点桥联后，其构型发生变化，导致Clr，Cls的相续活化。Clr在Cl大分子中起着连接Clq和Cls的作用。Clq启动后引起Clr构型改变，成为活化的Cl^-r，后者使Cls活化。Cl^-r使Cl^-s肽链裂解，具有酯酶活性。经典路径中Cl^-s一旦形成，即完成识别阶段，并进入活化阶段。Clr是一种分子量大约83000的单链糖蛋白，当被激活时裂解为A链(Mr56000)和B链(Mr27000)，它们由一个二硫化物键连接。A链包含前体蛋白的氨基末端，初始反应时激活Cl大分子。B链的补体氨基酸末端包含了酶触反应的区域。(Arlaud，G.J.，& Gagnon，J.(1983)Biochemistry22，1758-1764)

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与补体Clr的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为补体Clr78.76。

由于如上所述补体Clr78.76蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的补体Clr78.76蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新补体Clr78.76蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——补体Clr78.76以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码补体Clr78.76的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码补体Clr78.76的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产补体Clr78.76的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——补体Clr78.76的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——补体Clr78.76的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与补体Clr78.76异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；