[发明专利]核酸网状分枝扩增技术

说明书

技术范围：本发明是一项全新的核酸扩增技术，具有多项特性。适用于快速检测传染性病原体，和正常或异常基因；以及基因组的表达；抗原、抗体检测，及蛋白质的定性、定量检查。实用于血液病、肿瘤、传染病、法医学、血库以及遗传性疾病的诊断，以及新药的研究与开发。

发明背景：目前，有许多用于快速准确检测异常基因或病原体的方法。例如，聚合酶链反应(PCR)；连接酶链反应(LCR)；链取代扩增(SDA)；以及转录扩增(TBA)等技术均为检测微量病原体核酸序列的有效方法。然而，上述所有技术都有不足之处，PCR需要昂贵的设备，而且扩增温度须随靶核酸的不同而不同。为此，给临床的实际检测工作带来了诸多不便，这些困难在对于定量PCR和多个靶核酸的DNA/RNA检测时，显得尤为突出。至于其他的原位扩增和检测，由于加热所造成的形态学的改变，小扩增产物的扩散及重复性差等问题的存在，使其技术难度甚高，难以应用于临床检测，此外，蛋白质检测，由于敏感度低，临床应用受到限制。

优异性：1、本发明方法，利用DNA多聚酶引物的延伸及分离特性，使同一种酶能完成引物延伸，及网状分枝扩增。因此，百万倍扩增可在同一温度下短时间内顺利完成。此外，网状杂交扩增可在无酶参与情况下完成，因而更为简单而方便。

2、网状分枝扩增使用通用引物，在同一反应试管中可同时检测多个靶核酸。

3、由于靶核酸捕获，环状扩增反应，以及检测三步骤，都可在同一固体支持物上完成。从而，简化了检测方法，使其可在一般诊所，临床化验室，甚至露天中操作，具有很强的实用，应用价值。

4、本发明方法，使分离、扩增、检测靶核三步骤可在同一反应试管中完成；并运用连接反应，即结合靶核酸的环状探针，能特异地与引物连接区相结合。因此，这一特性可被用于检测单一碱基突变，如廉刀细胞性贫血，或K-ras癌基因。

5、网状杂交扩增技术，可用于核酸检测，以及蛋白质检测。包括抗原、抗体、氨基酸和固体支持物，此方法检测快速，简洁，无需任何酶学反应参与。

图1是环状扩增探针图，图2是网状分枝扩增图，图3是网状杂交扩增图，图4是延伸网状扩增图，图5是环状扩增图，图6是网状杂交扩增图，图7是荧光探针图。