[发明专利]用于核移植的供体细胞的制备和选择

说明书

发明背景

A.细胞同步

细胞周期分析的一种重要方法是使细胞能够达到细胞周期(如S，M，G₁，或G₂)的相同时期的能力。几年前已可作到细胞同步化，可以使用或不使用化学物质。同步化的最佳方法之一利用这样的事实：球形的，有丝分裂期(M)细胞与玻璃表面的黏附力小于分裂间期细胞(如，分裂间期的细胞是那些在S，G₁，或G₂的细胞)。所以振荡细胞培养物可以分离得到大量未污染的M期细胞(参见JAMES D.WATSON等，MOLECULAR BIOLOGYOF THE GENE 971(4^thed.，1987)。非化学的“振荡分离”(shake-off)技术对于中国仓鼠卵巢(CHO)细胞和一些HeLa亚系的效果很好(R.IANFRESHNEY，CULTURE OF ANIMAL CELLS：A MANUAL OF BASIC TECHNIQUES384-385(3^nded.1994)；和Zwanenburg，Mutat.Res.120：151-9(1983))。在同步化人二倍体成纤维细胞中使用机械的振荡分离得到可与CHO的观察结果相比的成功(Tobey等Exp.Cell Res.179：400-16(1988))。振荡分离法已应用于同步化胚胎鹌鹑骨骼成肌细胞(Devlin等，Dev.Biol.95：175-92(1983))和HeLa细胞(Wheatley等，Cytobios.55：191-204(1988))。另一种同步细胞到G₁的机械方法是使用离心淘析，该方法导致细胞暂时滞留在G₀期(Zickert等，Exp.Cell.Res.207：115-21(1993))。

细胞同步化还可以通过结合机械振荡分离和化学物质(如蚜栖菌素)来得到(Graves等，Anal.Biochem.248：251-7(1997))。但是，使用药物(如蚜栖菌素或羟基脲)对CHO细胞有毒负作用，而振荡分离则没有(Fox等，Cytometry 8：315-20(1987))。可单独使用药物同步化细胞。G₁和/或G₀滞留药物包括地塞米松(Goya等，Mol.Endocrinol.7：1121-32(1993))，以及其它糖皮质激素(Sanchez等，Cell Growth Differ.4：215-25(1993))，或者双配位基3-羟基吡啶-4-酮(HPO)和六配位基去铁胺(DFO)(Hoyes等，Cancer Res.52：4591-9(1992))。其它的G₁特异性细胞周期同步化试剂在Gadbois等，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA89：8626-8630(1992))的文章中讨论。

温度已经被用来介导细胞的细胞周期。冷激(cold-shock)可同步外周血或骨髓中不成熟的粒细胞(Boucher等，Hum.Genet.54：207-11(1980))。通过将细胞转换到低温，例如30℃，人类二倍体成纤维细胞即停滞在G₁期(Enninga等，Mutat.Res.130：343-53(1984))。使用机械振荡分离方法使CHO细胞达到同步化之后，利用温度将细胞周期停滞在G₁期，S期，晚S期和G₂+M期(Schneiderman等，Radiat.Res.116：283-91(1988))。