[发明专利]用于体外受精的组合物

说明书

本发明涉及一种可被用于体外受精的固体产物。

本发明的背景

已经发现了几种减数分裂激活物质(下文称作MAS)。

当MAS被保持在含有卵母细胞的培养基中时，卵母细胞变得更加容易受精。然而，使用MAS的主要问题在于它们通常具有非常低的溶解度。

本发明的概述

本发明的一个目的是研制一种含有MAS或其一种能溶于水介质中的衍生物的组合物。

本发明的另一个目的是研制一种含有MAS或其一种不需要任何物理干预如加热、搅拌或超声波处理就能溶于水介质中的衍生物的组合物。本发明的详述

优选的MAS，即FF-MAS，在水中的溶解度很小，即大约为20皮克/ml(相当于2×10^-5μg/ml)，而在乙醇中的溶解度相当大，即大约为4mg/ml。根据我们的初步研究，FF-MAS在乙醇和水(1∶2.5)中的最大溶解度大约为0.4mg/ml。几种其它的MAS在水中也具有类似低的溶解度。

令人惊奇地是，目前已经发现含有MAS和一种添加剂的固体组合物在水中具有良好的溶解性。所述添加剂是这样一种组分，当添加到MAS中时，可以提供一种能被用来制备一种含有MAS的水溶液的组合物。  

所述添加剂的实例是水溶性蛋白质如血清白蛋白，例如人血清白蛋白(本文被称作HSA)，选择性地以重组的形式存在，酶和磷酸甘油酯如磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇。

优选地，本发明的组合物的含量低于10％，优选地低于5％，更优选地低于1％(重量/重量)。

优选地，本发明的组合物中的有机溶剂含量低于10％，优选地低于5％，更优选地低于1％(重量/重量)。

优选地，本发明的组合物的MAS含量低于1％，优选地低于0.1％，更优选地低于0.05％(重量/重量)。

优选地，本发明的组合物的添加剂含量高于99％，更优选地高于99.9％。  

本发明的优选组合物是这样一种组合物，其可以用不含有或只含有低浓度有机溶剂的水介质进行处理产生一种含有MAS的溶液。优选地，这些水介质含有少于1％，优选地少于0.5％，更优选地少于0.1％的有机溶剂(重量/重量)。

早期，为了满足这一要求所进行的数次尝试都失败了。

本文中，术语MAS是指介导卵母细胞进行减数分裂的化合物。更具体地，MAS是在下述实施例1中的试验中具有明显高于对照的生发泡裂解(下文被称作GVB)百分率的化合物。优选的MAS具有至少50％的GVB百分率，优选地至少80％。优选的MAS的实例是4，4-二甲基-5α-胆甾-8，14，24-三烯-3β-醇(下文称作FF-MAS)；4，4-二甲基-5α-胆甾-8，14，24-三烯-3β-醇半琥珀酸酯；5α-胆甾-8，14-二烯-3β-醇；5α-胆甾-8，14-二烯-3β-醇半琥珀酸酯；(20S)-胆甾-5-烯-3β，20-二醇；3β-羟基-4，4-二甲基-5α-胆甾-8，14-二烯-24-酸-N-(甲硫氨酸)酰胺；和胆甾-5-烯-16β-醇。其它的MAS实例是在WO 96/00235，96/27658，97/00884，98/28323，98/54965和98/55498中提到的MAS，更具体地是在其权利要求1中提到的MAS。

制备本发明的组合物的一种方法是将MAS在有机溶剂如乙醇中的溶液与添加剂的水溶液混合，然后直到所述溶剂蒸发尽。通过利用该产物上方持续流动的空气、真空或任何其它用于除去溶剂的可行方法来加快蒸发进程。被销售的该产物可以是一种具有一个或多个凹或穴的递送系统。下文中，这些凹和穴被相互称作穴。这些穴中的至少一个含有一种本发明的组合物。放置该固体MAS的合理可行的方法是首先将含有MAS和所述添加剂的溶液放置在穴中，然后使该溶液进行蒸发。以这种方式获得的蒸发残留物，即本发明的组合物被直接置于所述装置(递送系统)的穴中。

由于本发明的组合物被用于卵母细胞的处理，所以对于本发明的组合物来说，不含对卵母细胞产生负面影响的组分是相当重要的。

使用本发明组合物的一种方法是在水介质如水中溶解该组合物，然后，如果需要，添加其它的对卵母细胞的成熟可能具有有益影响的组分。

使用本发明组合物的另一种方法是在一种通常用于体外成熟的介质中溶解该组合物。