[发明专利]在质粒序列转录过程中防止畸变RNA形成的方法和组合物

权利要求书

1.双链多核苷酸分子，包括第一条编码链和第二条转录模板链：

(a)所述第一条编码链包括

   (i)一个表达盒序列，从5’端到3’端，包括启动子、由所述启动子控制其表达的选定多核苷酸序列和poly A位点，以及

   (ii)至少一个第一条链终止子序列；以及

(b)所述第二条链与第一条链互补，其中，所述第二条链与第一条链终止子序列互补的部分不阻止第二条链上与第一条链表达盒互补序列的转录，并且，其中所述第二条链包括至少一个第二条链终止子序列，该序列终止始于所述第二条链上与所述第一条链表达盒互补的第二条链序列之外的转录。

2.权利要求1的多核苷酸分子，其中所述第一条链终止子序列选自位于所述启动子5’端的终止子序列，位于所述poly A位点3’端的终止子序列，位于所述第一条链所述表达盒序列之外的终止子序列，以及位于所述表达盒选定多核苷酸序列之内的终止子序列。

3.权利要求1的多核苷酸分子，其中所述第二条链终止子序列位于所述第二条链，其序列与所述表达盒序列不互补。

4.权利要求1的多核苷酸分子，其中所述第一条链还进一步包括与核糖核裂解位点互补的序列。

5.权利要求1的多核苷酸分子，其中所述第一条链还进一步包括与催化位点互补的序列。

6.权利要求4的多核苷酸分子，其中所述核糖核裂解位点是RNA不稳定序列。

7.权利要求6的多核苷酸分子，其中所述不稳定序列位于所述第一条链第二个终止子序列的3’端，第一个终止子序列的5’端，或位于编码序列内。

8.权利要求2的多核苷酸分子，其中所述第一条链终止子序列位于所述启动子5’端1-50个核苷酸的位置。

9.权利要求2的多核苷酸分子，其中所述第一条链终止子序列位于所述第一条链上所述poly A位点3’端大约100个核苷酸的位置。

10.权利要求9的多核苷酸分子，其中所述第一条链终止子序列位于所述第一条链上所述poly A位点3’端大约150个核苷酸的位置。

11.权利要求2的多核苷酸分子，其中所述第一条链包括至少2个终止子。

12.权利要求2的多核苷酸分子，其中所述第一条链终止子序列可以降低所述第一条链的多余转录。

13.权利要求1的多核苷酸分子，其中所述第一条链没有超过7个核苷酸的倒转互补重复序列。

14.权利要求11的多核苷酸分子，其中所述第一条链终止子序列独立选自细菌终止子、噬菌体终止子、真核RNA休止位点紧随其后的poly A位点、α球蛋白终止子紧随其后的poly A位点、组蛋白加工信号、所述休止位点紧随其后并提供核酶裂解位点的多核苷酸序列、所述休止位点紧随其后的核糖核酸裂解位点、rho依赖性终止子、rho非依赖性终止子、以及环状单链挂锁式多核苷酸序列，该序列与所述多核苷酸分子扭转连接，该连接通过在挂锁上的至少10个连续核苷酸与所述第一条链上的至少10个连续核苷酸杂交形成。

15.权利要求1的多核苷酸分子，其中所述第二条链包括1个以上的终止子序列。

16.权利要求1的多核苷酸分子，还进一步包括至少1个RNA不稳定序列，该序列位于第二条链与所述第一条链表达盒序列互补序列之外的位置。

17.权利要求1的多核苷酸分子，其中所述第二条链没有超过7个核苷酸的倒转互补重复序列。

18.权利要求1的多核苷酸分子，其中所述第二条链没有超过4个核苷酸的倒转互补重复序列。

19.权利要求1的多核苷酸分子，其中所述第二条链终止子序列位于所述第一条链poly A位点的3’端。

20.权利要求1的多核苷酸分子，其中所述第二条链终止子序列位于第二条链上与所述第一条链表达盒序列互补序列之外，距poly A位点少于200个核苷酸。

21.权利要求1的多核苷酸分子，其中所述第二条链终止子序列位于所述第一条链启动子的5’端。