[发明专利]来自MAGE的免疫原性肽及其应用

说明书

本发明涉及来源于MAGE家族蛋白的肽，还涉及这些肽作为免疫原在肿瘤预防和治疗中的用途。

在过去的几年里，使用肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)得以分离到几个编码肿瘤抗原的基因(Van den Eynde，B.J.等，Curr.Opin.Immunol.，9：684-693，1997)。按照在肿瘤和正常组织中的表达模式，这些抗原依据肿瘤特异性及临床相关性能分成四类。第一类包含在不同组织类型(histotype)的各种肿瘤中表达但在除睾丸生殖细胞外所有正常组织中都不表达的基因编码的抗原，例如：MAGE(黑素瘤相关抗原)、GAGE和BAGE。第二类代表分化抗原，仅在黑素瘤和黑素细胞中表达，例如酪氨酸酶、Melan-A/MART-1、gp100、TRP-1和TRP-2。属于第三类的抗原由普遍表达的基因经过点突变产生。第四类抗原，仅在最近才被定义，其代表是TRP-2-INT2，一种黑素瘤中共同存在的而在黑色素细胞谱系的正常细胞中不表达的抗原。

特别是属于MAGE家族的肿瘤抗原引起相当大的兴趣，因为它们中的六个，MAGE-1、2、3、4、6和12被相当一部分原发和转移瘤(包括黑素瘤、肺癌、膀胱癌、卵巢癌和乳腺癌)选择性表达(van der Bruggen，P.，等，Science，254：1643-1647，1991)。

来源于MAGE-1蛋白(van der Bruggen，P.，等，Science，254：1643-1647，1991)和MAGE-3蛋白的细胞内加工的9氨基酸肽，长度为8-10个氨基酸，已经公开并被认为是免疫原性物质(WO 95/19783)。

基于使用MAGE-1和MAGE-3编码抗原性肽的疫苗接种临床实验，在黑素瘤和其它肿瘤患者身上取得进展(Machand，M.等，Int.J.Cancer80：219-230，1999)。迄今为止，实际上MAGE-2、4和6抗原不能被认为是肿瘤抗原，因此它们不能用作肿瘤特异性免疫治疗的靶子。原因是还没找到能够识别来源于MAGE-2、4和6的肽的细胞毒性T淋巴细胞。

基于使用肽的治疗方案的局限性在于已表征的CTL表位(也就是说，肿瘤抗原肽和适当的HLA-I类等位基因)是有限数量的，并且体内产生了丢失抗原性的变异体，其能够逃避由单抗原性疫苗引发的免疫反应(Restifo，N.P.，等，J.Natl.Cancer.Inst.，88：100-108，1996)。特别是，丢失抗原性的变异体的产生，是免疫程序失败的一个主要原因，已发现这是由于选择出不表达被肿瘤反应性淋巴细胞识别的抗原的肿瘤细胞，例如作为分子缺陷的结果，导致HLA-I类等位基因的缺失或下调(Garrido，F.，等，Immunol.Today，14：491-499，1993)。然而，在某些情况下，肿瘤失去或改变了编码肿瘤抗原的基因(Jager，E.等Int.J.Cancer，71：142-147，1997)，用另一种机制来逃避免疫控制。

通常，肿瘤特异性免疫的临床方案只应用于携带了表达熟知肿瘤抗原和确定HLA等位基因的肿瘤的患者。不幸的是，大多数肿瘤患者不满足这些标准。因此，有必要鉴定新的抗原决定簇以用于抗肿瘤的免疫方案中，优选的是“广谱”的那些，即被更多数量肿瘤组织类型表达的或在同一肿瘤的多种形式中表达的。

现已发现，并且这也是本发明的第一方面，由MAGE-1、2、3、4、6和12基因同源区域编码的一组肽，鉴别为新的HLA-B*3701限制的表位。

根据它们的来源，本发明中的肽被命名为MAGE-1、2、3、4、6和12_127-136，并在SEQ ID NO.1-3中报道了其序列。MAGE-1、2、3和6有相同序列，如SEQ ID NO.1所述，而MAGE-4和12的序列分别是SEQ ID NO.2和3。

体外细胞毒性试验已证明细胞毒性T细胞识别表达MAGE-1、2、3、4、6和12不同抗原的各种细胞系上结合HLA-B*3701组织相容性等位基因(allele)的本发明肽，并在暴露于它们时被活化。在这些试验中，具有SEQ ID NO：1序列的肽显示最高活性，因此是优选的。