[发明专利]用树状细胞一肿瘤细胞或树状细胞一病毒细胞衍生的免疫原在体外诱导抗原特异性T－销细胞

说明书

                    相关申请的相互参照

本申请是于1998年2月26日提交的美国系列申请No.09/030,985的后续申请，No.09/030,985要求以1997年2月27日提出的美国系列申请No.60/039,472为优先权。

                         技术领域

本发明总体涉及抗原特异性T-细胞及其制备和使用方法。更特别地，本发明涉及抗原特异性T-细胞，这些抗原特异性T-细胞是通过与免疫原共培养而产生的，免疫原是从含有树状细胞和肿瘤细胞的杂交瘤或树状细胞和肿瘤细胞的共培养产物的制剂产生的。或者，在这些杂交瘤和共培养物中，可以用病毒感染的细胞代替肿瘤细胞。用这些T-细胞作为对抗肿瘤和病毒感染的预防药物和治疗剂也是本发明的主题。

                         背景技术

T-细胞，包括细胞毒性T-淋巴细胞(CTLs)，是人类对肿瘤和病毒感染产生有效的免疫应答的决定性的成分。T-细胞应答足以对抗肿瘤和病毒并能够消除甚至在鼠肿瘤模型和人体已建立的恶性肿瘤。T-细胞通过识别在效应靶细胞表面的MHC I类分子上呈递的抗原性肽，而破坏增生的细胞或病毒感染的细胞。这些抗原性肽是出现在效应细胞的胞质中的外来蛋白质的降解产物，其通过内源性MHC I类加工途径而被加工并呈递给T-细胞。CTLs通过识别由自身MHC I类分子和肽抗原构成的配体而靶向肿瘤。因此，依赖于CTL的抗肿瘤免疫方法的发展，一般取决于由CTLs进行的肿瘤抗原识别和有效的抗原传递方法的发展。

虽然CTLs对MHC I类分子范围内的外源性的蛋白质的识别可能足以识别和破坏CTL效应靶细胞，从T-淋巴细胞前体诱导抗原-特异的CTLs需要另外的信号。专门的抗原-呈递细胞(APCs)能提供在CTL介导免疫的诱导过程中所需的抗原MHC I类配体和辅助信号。APCs常规的性质包括MHC I类和II类表达，对APC-淋巴细胞相互作用具有重要性的各种粘附分子的表达，及共刺激分子如CD80和CD86的表达。APCs包括，例如，巨噬细胞，B-细胞，和树状细胞，树状细胞包括皮肤表皮朗格罕氏细胞，真皮树状细胞，和位于淋巴结和脾的树状细胞。认为树状细胞(DC)是最有效的APCs，并能诱导有效的CTL-依赖型抗肿瘤免疫。已经有从骨髓或外周血衍生前体得到有效数量的树状细胞的方法。

可能肿瘤细胞表达一套可以被CTL识别的肿瘤-特异的肽MHC配合物。然而，进行性的肿瘤一般不具有致免疫性，至少部分不是致免疫的，因为它们不能提供共刺激。

Guo等，在Science 263：518-520(1994)，公开了通过使肝细胞癌细胞与活化的B-细胞融合而产生的肿瘤疫苗。活化的B-细胞和肿瘤细胞的融合产生能导致肿瘤-特异的保护性的肿瘤免疫力的免疫原。

Mayordomo等，在Nature Med.1(12)：1297-1302(1995)，公开了肽脉冲刺激的(peptide-pulsed)树状细胞的体外培养物，它显示对抗伴随的肿瘤攻击的保护作用。在GM-CSF+IL-4存在培养并用鸡卵清蛋白(OVA)转染的树状细胞能防止OVA⁺肿瘤的确立，但对未经转染的母体(parental)黑素瘤没有这种作用。

Flamand等，在《欧洲免疫学杂志》24：605-610(1994)，公开了用肽抗原BCL1脉冲刺激的树状细胞的体外培养，并随后引入针对B-细胞肿瘤BCL1的T-细胞依赖型体液应答。Celluzzi等，在J.Exp.Med.，183：203-287(1996)报道了一种相似的方法。其中，以MHC I-肽抗原对树状细胞进行脉冲刺激；已被免疫的宿主对抗原基因转染的肿瘤产生的致命的攻击显示出保护性的免疫力。

Hsu等，在Nature Med.2：52-58(1996)调查了用肿瘤-特异的独特型蛋白质脉冲刺激的树状细胞作为疫苗的应用。

Celluzzi和Falo在J.Immunol.3081-3085页(1998)公开了含有融合到肿瘤细胞中或与肿瘤细胞共培养的树状细胞的制剂。

Gong等，在Nature Med.3：558(1997)公开了树状细胞与MC38癌细胞的融合。