[发明专利]对雌激素受激亮氨酸氨基太酶的单克隆抗体

说明书

此项发明论述能和亮氨酸氨基太酶(es-LAPase)的人类雌激素响应的同功酶特异性结合的单克隆抗体。也论述了被称为7B6的骨髓瘤细胞系及由此产生的单克隆抗体。进一步论述了用来自骨髓瘤细胞系7B6的单克隆抗体检测血液，血清，或血浆中对LAPase的雌激素响应同功酶水平的诊断系统。这一抗体特别适用于快速诊断乳腺癌。

发明背景

对人类疾病如乳腺癌进行有效检测及设计治疗药物的关键在于能够鉴别危险因素和病理生理改变。在各种与乳腺癌早期形成有关的危险因素中，雌激素及与雌激素有相似活性的雌激素类似物仍是对乳腺癌早期发生和发展的最重要的被检物。在正常生理条件下，有些组织是雌激素起关键作用的器官，例如生殖系统和第二性器官如乳腺。此外，雌激素还可以通过促使靶细胞增殖来参与骨生长调节，肝脏，心血管功能及激素代谢周期。这些不同组织对雌激素的反应能部分解释雌激素在不同人类肿瘤特别是乳腺肿瘤的发病和发展方面所起的活性作用。尽管雌激素刺激调节各种生理功能的精确分子机制需要进一步阐述，雌激素参与了初期和早期细胞功能。因此，由雌激素引起细胞早期活动导致细胞增殖，很可能是通过加速细胞由G1期向S期发展的速率，而缩短细胞周期。最近有报道，在相同浓度下雌激素可以通过共同激活细胞周期蛋白D1-CdK4和E-CdK2这两个密切相关的关键的G1调节太的表达来促进细胞增殖。

广泛应用的乳腺癌诊断方法有影像技术，如超声，X射线法。但是这一技术受到影像分辨率的限制，只能诊断大到一定程度的肿瘤。

活组织的组织学分析是诊断乳腺癌的另一常用方法。这一方法依赖于可见的细胞类型鉴别。虽然这种方法比较客观，但要靠检测者的技术水平。

分子诊断测定广泛应用于活组织细胞中雌激素和孕激素受体检测，从而确定此种肿瘤是否对激素治疗有效。

流动细胞学分析也用于测定一些参数，如与肿瘤细胞相关的DNA含量，细胞周期特定时期的细胞比例。

然而，细胞学，雌激素和孕激素受体分析，及流动细胞学分析都需取活组织，样品处理复杂。

显然，迫切需要一种快速，灵敏，较少侵害性的方法来对乳腺癌进行诊断。尤其是灵敏的分析方法来检测血液中能够反映转移是否存在的细胞标记物。更重要的是需要在乳腺癌发展过程中起主导作用的雌激素的细胞标记，而不是对雌激素起作用的雌激素和孕激素受体。

发明概述

目前的发明是关于对人类es-LAPase特异结合的单克隆抗体。进一步论述用单克隆抗体检测血液，血清，血浆或组织中LAPase水平的诊断方法。

根据此发明可提供对es-LAPase特异性单克隆抗体。

进一步提供通过检测样品中es-LAPase水平检测转移癌的方法。

图例简介

下图进一步说明我们的发明：

图一：说明乳腺癌细胞系母细胞上清液中雌激素对LAPase活性的作用。

图二：说明用Bestatin，thioredoxin和glutathione抑制LAPase的动力学。

优选实施方案的描述

此项发明说明单克隆抗体对在可溶型或膜形式的es-LAPase的特异性结合。进一步论述用单克隆抗体检测血液，血清，血浆或组织中es-LAPase水平的诊断系统。

为了从乳腺肿瘤和组织母细胞中寻找对雌激素响应的细胞因子，研究者分离出了假设的LAPase的同功酶。LAPase同功酶通过estradiol恒温乳腺肿瘤母上皮细胞而释放进入超细胞环境。雌激素活性取决于计量，产生活性的最佳LAPase浓度为100nM。

为了获得对雌激素有反映的LAPase同功酶，将人乳腺癌组织上皮细胞与雌激素一起培养。最好与浓度范围在10^-8-10^-5M(10^-7M)的estradiol一起培养。参照图一，显然这一培养过程促进了LAPase得释放。该酶用HPLC-凝胶渗透，然后用DEAE-纤维素和Bestatin-Sepharose亲和色谱从细胞上清液中提纯。用不同柱子的凝胶渗透分析结果，提纯后的LAPase分子量为315 kDa。这一LAPase同功酶与文献报导的其它同功酶分子量有明显差别。