[发明专利]L－氨基酸生产菌以及用于生产L－氨基酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物工业领域技术。具体来说，本发明涉及通过发酵生产L-氨基酸的方法以及在该方法中使用的微生物。

背景技术

在工业上采用短杆菌属(Brevibacterium)、棒杆菌属(Corynebacterium)、芽胞杆菌属(Bacillus)、埃希氏菌属(Escherichia)、链霉菌属(Streptomyces)、假单胞菌属(Pseudomonas)、节杆菌属(Arthrobacter)、沙雷氏菌属(Serratia)、青霉属(Penicillium)、念珠菌属(Candida)等微生物发酵生产氨基酸，例如L-赖氨酸、L-谷氨酸、L-苏氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-缬氨酸和L-苯丙氨酸。为了提高生产率，使用分离自大自然的菌株或其人工突变体用作这样的工业微生物。已经公开了各种通过利用重组DNA技术增强L-谷氨酸生物合成酶的活性的技术，以提高L-谷氨酸的生产能力。

通过培育微生物例如上述微生物以及改进生产方法已经显著提高了L-氨基酸的生产能力。但是，为了进一步达到未来更高的要求，仍然需要开发以更低成本更有效生产L-氨基酸的方法。

关于通过发酵中醇(可以低成本大量获得的发酵原料)生产氨基酸的方法，常规已知方法采用以下微生物：无色杆菌属(Achromobacter)或假单胞菌属(Pseudomonas)(日本专利公布(Kokoku)号45-25273/1970)、精朊杆菌属(Protaminobacter)(日本专利申请公开(Kokai)号49-125590/1974)、精朊杆菌属或甲烷单毛杆菌属(Methanomonas)(日本专利申请公开(Kokai)号50-25790/1975)、微环菌属(Microcyclus)(日本专利申请公开(Kokai)号52-18886/1977)、甲基菌属(Methylobacillus)(日本专利申请公开(Kokai)号4-91793/1992)、芽胞杆菌属(日本专利申请公开(Kokai)号3-505284/1991)等。

然而，迄今为止已知没有利用嗜甲基菌属细菌(Methylophilusbacteria)生产L-氨基酸的方法。尽管已知EP 0 035 831 A、EP 0 037 273A和EP 0 066 994 A描述的方法为利用重组DNA转化嗜甲基菌属细菌的方法，但是利用重组DNA技术改进嗜甲基菌属细菌的氨基酸生产能力仍然不为人们所了解。

发明公开

本发明的目的是提供新型L-氨基酸生产菌和利用所述L-氨基酸生产菌生产L-氨基酸的方法。

本发明人致力于实现上述目的，结果发现嗜甲基菌属(Methylophilus)细菌适用于生产L-氨基酸。而且，尽管通常认为获得嗜甲基菌属细菌的营养缺陷型突变体是困难的(FEMS Microbiology Rev.39，235-258(1986)和Antonie van Leeuwenhoek 53，47-53(1987))，但是本发明人成功获得了所述细菌的营养缺陷型突变体。因此完成了本发明。

也就是说，本发明提供以下细菌：

(1)一种具有L-氨基酸生产能力的嗜甲基菌属细菌。

(2)按照(1)的嗜甲基菌属细菌，其中所述L-氨基酸是L-赖氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸或L-苏氨酸。

(3)按照(1)的嗜甲基菌属细菌，它可耐受L-氨基酸类似物或L-氨基酸辅源营养(auxotrophy)。

(4)按照(1)的嗜甲基菌属细菌，其中L-氨基酸生物合成酶活性提高。

(5)按照(1)的嗜甲基菌属细菌，其中二氢吡啶二羧酸盐合酶活性和天冬氨酸激酶活性提高，而且所述细菌具有L-赖氨酸生产能力。

(6)按照(1)的嗜甲基菌属细菌，其中二氢吡啶二羧酸盐合酶活性提高，而且所述细菌具有L-赖氨酸生产能力。

(7)按照(1)的嗜甲基菌属细菌，其中天冬氨酸激酶活性提高，而且所述细菌具有L-赖氨酸生产能力。

(8)按照(5)-(7)任一项的嗜甲基菌属细菌，其中选自天冬氨酸半醛脱氢酶、二氢吡啶二羧酸盐还原酶和二氨基庚二酸盐脱羧酶的一种、两种或三种酶的一种或多种活性提高。

(9)按照(5)的嗜甲基菌属细菌，其中所述二氢吡啶二羧酸盐合酶活性和所述天冬氨酸激酶活性提高，因为编码不影响L-赖氨酸的反馈抑制的二氢吡啶二羧酸盐合酶的DNA和编码不影响L-赖氨酸反馈抑制的天冬氨酸激酶的DNA通过导入转化细胞。