[发明专利]人类成年星形胶质细胞,它们的制备及应用

说明书

发明领域

本发明涉及的研究领域为神经生物学。更确切地讲，本发明涉及纯化的人类成年星形胶质细胞，它们的制备方法和应用，尤其是在神经退行性疾病或中枢神经系统损伤的治疗中的应用。

                      发明背景星形胶质细胞

细胞移植和转基因技术的联合为神经退行性疾病和损伤性损伤提供了一种治疗途径。几种细胞类型，如先祖细胞、神经细胞、胶质细胞、成纤维细胞及成肌细胞已被研究用于向中枢神经系统(CNS)导入基因的载体(Wolff等，1989；Horellou等，1990a，b；Fisher等，1991，1993；Gage等，1995；Sabate等，1995；Fisher，1997；Martinez-Serrano和Bjorklund，1997)。目前人们的注意力集中在基因工程改造的星形胶质细胞的治疗活性上(Cunningham等，1991，1994；LaGamma等，1993；Castillo等，1994；Pundt等，1995；Lundberg等，1996；Lin等，1997)。星形胶质细胞在脑损伤修复方面尤为重要，因为星形胶质细胞是正常中枢神经系统的组成成分，具有高效的分泌机能，且可通过释放促进神经元生存、分化和再生的营养因子来为神经元提供支持。此外，星形胶质细胞可培养扩大和经遗传改造表达外源性转基因。近来，人们培养了由合法堕胎得来的人类胎儿的星形胶质细胞，且成功地转导了可驱动活性神经生长因子(NGF)表达的反转录病毒(Lin等，1997)。

人类成年星形胶质细胞更适合于人脑的损伤修复，因为它们允许自体同源的离体基因导入，从而避免了免疫学的排斥和免疫抑制剂的副作用。在目前试图培养人类成年星形胶质细胞的研究中，有人报导了小胶质细胞的污染问题(Yong等，1991，1992)。基因治疗

离体基因转移涉及治疗细胞向病人的输送(Wolff等，1989；Horellou等，1990a，b；Fisher等，1991，1993，Gage等，1995；Sabate等，1995；Fisher等，1997；Martinez-Serrano和Bjorklund，1997；Taylor，1997)。无限增殖化细胞系在基因治疗方面的应用价值是有限的，因为它们仍保留肿瘤发生的特性。与此相反，原代培养细胞更为合适。对于离体基因转移及后继的移植，最好的细胞类型就是星形胶质细胞(La Gamma等，1993；Castillo等，1994；Cunningham等，1994；Ridoux等，1994；Pundt等，1995；Lundberg等，1996；Lin等，1997)，它作为主要的支撑细胞及高效分泌机器正常地存在于中枢神经系统。通过预先修饰来产生酶、神经递质或营养因子的移植性星形胶质细胞可在中枢神经系统中进行整合及发挥适当的功能(见参考文献中的Taylor，1997)。原代培养的鼠星形胶质细胞可通过基因工程改造产生神经生长因子和脑源性神经营养因子(BDNF)，且在植入脑后可生存下来(Cunningham等，1991，1994；Yoshimoto等，1995)。

近来，对于人类星形胶质细胞的兴趣已经提高(Yong等，1991，1992；Aloisi等，1992；Perzelova和Mares，1993；Pundt等，1995；Lin等，1997)。Yong和他的同事们(1992)报道，高达80％的原代培养细胞是巨噬细胞/小胶质细胞。当去除大多数少突胶质细胞和小胶质细胞后，70％的细胞是星形胶质细胞(Yong等，1992)。存在于星形胶质细胞培养物中的小胶质细胞可在体外和体内引起不合需要的作用，因为它们不但增殖活跃，且又是免疫细胞群的主要组成成员。因此，需要一种可制备大量星形胶质细胞而不合有小胶质细胞污染的方法。正如下面要讨论的那样，本发明可满足这样的需求。本发明克服了星形胶质细胞制品不纯的弊端，且所提供的细胞制品适合于中枢神经系统损伤及神经退行性疾病的治疗，如帕金森氏、亨廷顿氏或阿尔茨海默氏病。

这里引用的任何参考文献都不应解释为承认这一文献对于本发明是可获得的现有技术。

                       发明概要

本发明提供了纯化的星形胶质细胞和它们的制备方法。作为优选的实施方案，星形胶质细胞是人类，成年星形胶质细胞。