[发明专利]一种新的多肽——Cu/ZnSOD蛋白9.9和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——Cu/ZnSOD蛋白9.9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

所有的活细胞都易于受氧毒害。为解决此问题，细胞中有一种酶能分解氧。单价分解氧产生氧负离子，氧负离子进一步形成过氧化氢和氢氧根。铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn SODC)是催化超氧化物自由基歧化作用的三种歧化酶之一。Cu/Zn SODC分子量大约32kd。它的两个亚基彼此相对独立，彼此间没有共价键连接，每一个亚基包含Cu/Zn各1-g原子。Cu/Zn SODC各结合一个锌原子和铜原子。Cu/Zn SODC有以下几种形式：真核细胞的细胞质形式，植物中额外的叶绿体形式，一些真核细胞的细胞外形式，原核细胞的周质形式。在已知的超氧化物歧化酶中，金属结合位点都是保守的，这些结合位点是结合铜原子的组氨酸48，50，77，135和结合锌原子的组氨酸77，86，95和天门冬氨酸98。组氨酸77是铜和锌原子的桥梁，铜与氧负离子的结合位点是单独和高度完整的。

Cu/Zn SODC家族有两个特征序列。[1][GA]-[IFAT]-H-[LIVF]-H-X(2)-[GP]-[SDX]-X-[STAGD]。其中，两个H代表铜配基。[2]G-[GN]-[SGA]-G-X-R-X-[SGA]-C-X(2)-[IV]。其中，C与二硫键有关。前一个序列包含两个结合铜原子的组氨酸残基。第二个序列位于SODC的C末端，包含一个与二硫键有关的半胱氨酸残基。

人类Cu/Zn SODC基因位于人类第21条染色体上，11kb长，有5个外元和四个内元。第一个外元有5’-GC，而不是高度保守的5’-GT。

Cu/Zn SODC异常将会导致单不限于以下几种疾病：氧化性溶血性贫血，地中海贫血，疟疾，范康式贫血，肌肉错位，胆囊纤维质生成，各种炎症。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与Cu/Zn SOD蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为Cu/Zn SOD蛋白9.9。

由于如上所述Cu/Zn SOD蛋白9.9蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的Cu/Zn SOD蛋白9.9蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新Cu/Zn SOD蛋白9.9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——Cu/Zn SOD蛋白9.9以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码Cu/Zn SOD蛋白9.9的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码Cu/Zn SOD蛋白9.9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产Cu/Zn SOD蛋白9.9的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——Cu/Zn SOD蛋白9.9的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——Cu/Zn SOD蛋白9.9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与Cu/Zn SOD蛋白9.9异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中352-624位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-861位的序列。