[发明专利]幽门螺杆菌ureC基因片段表达工程菌的构建及其产物的制备方法无效
| 申请号： | 00135460.4 | 申请日： | 2000-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN1358861A | 公开（公告）日： | 2002-07-17 |
| 发明（设计）人： | 徐俊荣;韩锋产;阎小君;张沥 | 申请（专利权）人： | 西安高科实业股份有限公司基因生命科技分公司 |
| 主分类号： | C12N15/31 | 分类号： | C12N15/31;C12N15/63;C12N15/70;C12N1/21 |
| 代理公司： | 西安新思维专利事务所有限公司 | 代理人： | 李罡 |
| 地址： | 710075 陕西省西安市*** | 国省代码： | 陕西;61 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 幽门 螺杆 urec 基因 片段 表达 工程 构建 及其 产物 制备 方法 | ||
本发明是关于幽门螺杆菌(Hp)尿素酶C亚基(ureC)基因片段表达工程菌的构建及其产物的制备方法。具体内容为：采用PCR方法获取ureC基因片段，构建ureC基因片段的温控表达工程菌，并选择合适的培养基及培养方法得到表达活力高、表达水平高及纯度高的目的蛋白。
幽门螺杆菌尿素酶C亚基(ureC)具有较高的抗原性；传统的幽门螺杆菌(Hp)培养方法一般需5-7天，浪费时间，且从菌体中提取该蛋白的工艺烦琐，回收率低，故采用基因重组技术制备该蛋白是获得抗原的重要途径。
本发明的目的是构建幽门螺杆菌ureC基因片段的表达工程菌及其产物的制备方法。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案为：
1)从幽门螺杆菌中提取总DNA；
2)用PCR方法从基因组DNA中扩增ureC基因片段；
3)将ureC基因片段连接在表达载体pBV220上；
4)将重组表达载体ureC-pBV220转入大肠杆菌DH5α中得工程菌。
上述的幽门螺杆菌ureC基因片段表达工程菌的构建，特征在于采用PCR方法从基因组DNA中扩增ureC基因片段，PCR引物序列设计如下：
上游引物：5’-GCTGAATTCATGTTAGGCATTGCTGCCGG-3’
下游引物：5’-GACGGATCCTCAGTTTTCAGTGCCGCTATA-3’
PCR扩增的序列如下：ATG TTA GGC ATT GCT GCC GGA TTG TAT TTT AAA AAA CAT TCT CAA M L G I A A G L Y F K K H S QACG AAT AAA ATT CTA ATC GGT AAA GAC ACC AGA AAA AGC GGC TAT T N K I L I G K D T R K S G YATG GTA GAA AAC GCT TTA GAG AGC GCT CTC ACT TCC ATA GGC TAT M V E N A L E S A L T S I G YAAT GTG ATT CAA ATA GGG CCT ATG CCT ACC CCT GCG ATT GCG TTT N V I Q I G P M P T P A I A FTTA ACC GAA GAC ATG CGC TGT GAT GCG GGC ATC ATG ATA AGC GCG L T E D M R C D A G I M I S AAGC CAC AAC CCT TTT GAA GAC AAT GGC ATT AAG TTT TTC AAT TCT S H N P F E D N G I K F F N STAT GGC TAT AAG CTT AAA GAA GAA GAA GAA AAA GCG ATT GAA GAA Y G Y K L K E E E E K A I E EATC TTC CAT GAT GAA GAA TTA CTG CAC TCT AGC TAT AAA GTG GGC I F H D E E L L H S S Y K V GGAG AGC ATC GGC AGT GCT AAA AGG ATA GAC GAT GTC ATA GGG CGC E S I G S A K R I D D V I G RTAT ATC GTG CAT TTA AAA CAC TCT TTC CCC AAA CAT TTG AAT TTA Y I V H L K H S F P K H L N LCAG AGT TTA AGG ATC GTG CTA GAT ACC GCT AAT GGT GCG GCT TAT Q S L R I V L D T A N G A A YAAG GTG GCT CCG GTC GTT TTT AGC GAG CTT GGG GCT GAT GTG TTA K V A P V V F S E L G A D V LGTG ATT AAT GAT GAG CCT AAT GGG TGT AAT ATT AAT GAG CAA TGC V I N D E P N G C N I N E Q CGGG GCT TTA CAC CCT AAC CAA TTG AGC CAG GAA GTG AAA AAA TAC G A L H P N Q L S Q E V K K YCGC GCG GAT TTA GGC TTT GCT TTT GAT GGC GAT GCC GAC AGG CTA R A D L G F A F D G D A D R LGTG GTG GTG GAT AAT TTA GGG AAT ATC GTG CAT GGG GAT AAG CTT V V V D N L G N I V H G D K LTTA GGG GTG TTA GGG GTT TAT CAA AAA ACT AAA AAC GCC CTT TCT L G V L G V Y Q K T K N A L STCT CAA GCG GTT GTC GCC ACG AGC ATG AGC AAT TTA GCC CTT AAA S Q A V V A T S M S N L A L KGAA TAC TTA AAA TCC CAA GAT TTA GAA TTA AAG CAT TGC GCG ATT E Y L K S Q D L E L K H C A IGGG GAT AAG TTT GTG AGC GAA TGC ATG CGA TTG AAT AAA GCC AAT G D K F V S E C M R L N K A NTTT GGA GGC GAG CAA AGC GGG CAT ATC ATT TTT AGC GAT TAC GCT F G G E Q S G H I I F S D Y AAAA ACC GGC GAT GGC TTG GTG TGT GCT TTG CAA GTG AGC GCG CTT K T G D G L V C A L Q V S A LGTG TTA GAA AGT AAG CAA GTG AGC TCT GTT GCG TTA AAC CCC TTT V L E S K Q V S S V A L N P FGAA TTA TAC CCC CAA AAC CTA GTG AAT TTG AAT GTC CAA AAA AAG E L Y P Q N L V N L N V Q K KCCT CCT TTA GAA AGC CTG AAA GGT TAT AGC GCT CTT TTA AAA GAA P P L E S L K G Y S A L L K ETTA GAC AAG CTA GAA ATC CGC CAT TTG ATC CGT TAT AGC GGC ACT L D K L E I R H L I R Y S G TGAA AAC TGA E N
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于西安高科实业股份有限公司基因生命科技分公司，未经西安高科实业股份有限公司基因生命科技分公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/00135460.4/2.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
