[发明专利]呋甾皂甙的类似物、分离方法和用途

说明书

本发明涉及植物中有效成份提取，更具体地说是白蒺藜植物有效成份的提取及在心血管疾病药物中的应用。

白蒺藜(Tribulus terrestris L.)系蒺藜科(Zygophyllaceae)植物。该药具有平肝潜阳、活血通络、理气化痰、宣痹通阳等功效，用于治疗脑血管障碍、高血压、冠心病等。<本经>主恶血破症结积聚、<药性论>治诸风疬疡、破宿血。<本草再新>：镇肝风，凉肝火，散湿破泻、益气化痰、散湿破血；<本经逢源>：专破恶积聚。<本草便读>：善行善破，专入肺、肝、宣肺之滞，疏肝之瘀。<本草汇言>：祛风下气，行水化瘀之药也。<本草纲目>：古方补肾制风皆用刺蒺藜。

从上述医书记载，白蒺藜是一味作用很强的中药为历代医家推荐之精品。

近年来，国内外学者对蒺藜全草(以下简称白蒺藜)的研究工作也在不断深入，各种化学提取物进行中药药理研究，不断有研究报道，认为白蒺藜提取物有抗动脉粥样硬化作用，能显著降低实验性高胆醇水平，防止动脉、心肌、肝脏中脂质的沉淀作用，能缩小实验性心肌梗塞的范围，具有明显的抗心肌缺血的能力等。虽然对白蒺藜作了很多的化学结构、化学提取工作，但目前在蒺藜中尚未确定一个对治疗心脑血管疾病理想的药物。

本发明的目的对白蒺藜植物进行化学分离，寻找出有效部位或单体进行药理临床试验，找到一种对心脑血管疾病有效药物。

本发明的另一目的是寻找一种对心血管疾病的有效部位或单体的制备方法。

白蒺藜有效成份提取：

白蒺藜经大量实验证明抗脑血管障碍病变的有效组分是属水溶性极大的皂甙类化合物，其中主要的活性成份是水解后为Hecogenin(海可甙元)甙元和Tigogenin(提集甙元)甙元的带5个或6个糖的呋甾皂甙。对粗提取方法首先研究了75％乙醇提取法、水提取物乙醇沉淀法和水提取液通大孔树脂法，三种方法比较，用75％乙醇提取物中含有很多脂溶性物，浓缩浸膏需用大量CHCl₃先处理除去脂溶性物，再进行大孔树脂分离，该方法成本高，需用大量的乙醇和氯仿。水提乙醇沉淀法，必须先浓缩水提液，浓缩液再用乙醇沉淀除无效的杂质，因为含有大量皂甙，浓缩时易产生大量泡沫带来困难。第三种方法是水提液直接通过大孔树脂，将皂甙富集，此工艺免除了大量的水溶液浓缩产生泡沫而冲料的困难，大孔树脂能富集皂甙，除去大量无效杂质，且能反复使用，在富集皂甙后用60％乙醇洗脱即可，该工艺适合于大生产，且比较经济。

上述方法所得的粗品，再经柱层析，用甲醇：水洗脱，每一流分为50ml，收集24-26流分、合并除去溶剂得1b，其他流分合并，再进行几次柱层析，流动相用氯仿∶甲酸∶水洗脱，相继分得2a，2b，3a，3b。

同样也可采用MCI Gel柱，先用H₂O洗脱，再用H₂O∶乙醇梯度洗脱，100ml为一流分，初步分离，用THL控制，合并相同斑点的流分，再分别进行多次正相硅胶柱层析，流动相同前，得1b，2a，2b，3a，3b。

图1为白蒺藜有效组分提取工艺流程

首先是白蒺藜全草磨成粗粉，然后加水煮提二次过滤分出水提液和药渣。药渣再加水煮提，过滤，分出的药渣丢弃，水提液作为下一料的水量，前二次的水提液，5-10℃放置12小时，过滤，滤液通过1400型树脂，药液通过后，继续用水洗，洗到流出量为无色为止，分出水洗脱液，通过的药液通完后，用60％-70％乙醇洗脱，洗脱液减压蒸馏回收乙醇，继续浓缩至比重1.37-1.40之间，浓缩液加数倍量乙醇，使其呈溶液5-10℃放置12小时，分出上清液，沉淀浆过滤，滤渣丢弃，滤液与分出上清液合并，减压浓缩呈浸膏，上硅胶柱，按浸膏∶硅胶＝1∶10。氯仿冲洗，然后氯仿∶甲醇梯度洗脱合并有效成分组分，然后减压浓缩至干，得产品。

采用上述有效成份提取工艺所得的产品，620mg通过Fuji gel(破碎型递相用的硅胶，ODSG 3型)柱，用甲醇∶水＝6∶4洗脱，每一流分50ml，以24-26流分分得1b，其他流分合并，再进行几次硅胶柱层析(青岛海洋化工厂生产的层析硅胶100-200目)用氯仿∶甲醇∶水＝7∶3∶0.5洗脱，相继分得1a，2a，2b，3a，3b，上述有效成份经过反复的正相及反相柱层析，主要成份为中极性的皂甙，分离得到6个呋甾皂甙化合物，它们是JL-saponin.la.它们的化学结构为：

R₁为-β-D-Glu

R₂为

R₃为H；O