[发明专利]一种新的多肽——人锌指蛋白9.35和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人锌指蛋白9.35，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

锌指蛋白是一种DNA结合蛋白，最早在非洲爪蟾RNA聚合酶III介导的5S rRNA基因转录因子TF III A蛋白的氨基酸序列中发现。此后发现锌指蛋白在不同生物的各种组织中均有表达，这些组织包括造血细胞、脑、神经系统、表皮组织、各种与分泌吸收相关的组织及与肿瘤和无限增殖细胞系相关的组织等。据估计在人类基因组上锌指蛋白基因超过了1％(Bellefroid et al.，1989；Pellegrino andBerg，1991)。锌指蛋白的锌指结构主要有以下几种：C2H2构型、C2C2构型、C2HC构型、C2HC4C构型、C3H构型、C3HC4构型(Dai KS et al.，1998)。其中含C2H2构型的锌指蛋白基因构成人类基因组最大的一族基因(Berker et al.，1995)。锌指蛋白的C2H2构型如下：

典型的锌指结构在长度上大约由28个氨基酸残基构成，为Cys-Cys……His-His排列，锌指单元包含有一段相对保守的序列：Cys-X_2-4-Cys-X₃-Phe-X₅-Leu-X₂-His-X_2-4-His(Bray，p.et al.，1993)。锌指结构中两个保守的Cys参与组成一个反向平行的β折叠，两个保守的His参与组成α螺旋，这两个结构与核心的Zn原子结合形成一个紧密的球形区域(Pabo，C.A.andSauer，R.T，1992)。此类锌指蛋白往往具有1个到82个锌指结构(Rhodes，D.andKlug，1993)。除了保守的锌指结构，连接两个相邻的Kruppel的C2H2构型锌指蛋白常常但不总是包含保守的特异性氨基酸序列TGEKP(Bray，p.etal.，1993)。在锌指蛋白中，Zn的作用是使蛋白质分子形成指型构象的骨架与DNA结合。

锌指结构在许多与“蛋白-核酸”和“蛋白-蛋白”相互作用有关的蛋白里都有发现。锌指蛋白可以与双链DNA(dsDNA)或单链RNA结合，执行着许多重要作用，其最重要的功能涉及基因的转录调控，并可能同时有信号传递因子的作用(EMBO J.12：1363-1374，1993)。现有的研究表明，C₂H₂类型的锌指结构域在发育调控中起关键作用。例如，在Drosopila Kruppel(Rosenberg，1986)和hunchback(Tautz，1987)锌指蛋白中，此结构域与胚胎模式形成有关；在鼠Krox-20锌指蛋白中，此结构域与后脑模式形成及细胞增殖控制有关(Chavrier，1988；Wilkinson，1989)，GL13在常染色体显性发育异常Greig综合症中(vortkamp，1991)中；有些锌指蛋白基因与肿瘤形成有关，如WT1在Wilm’s肿瘤及先天性生殖尿道发育中(Haber，1990)。

人锌指蛋白131-140，142，143，148，151，154，155都属于人锌指蛋白Kruppel基因家族，并从人胰岛瘤细胞cDNA中分离得到(Tommerup and Vissing，Genomics27：259-264，1995)。人锌指蛋白138，139，143分别与Williams综合症、裂手裂脚症、贝魏二氏综合症有关；人锌指蛋白132，134，135，137，154，155均可引起实体瘤如甲状腺腺瘤，人锌指蛋白151与成神经细胞瘤、结肠癌、乳腺癌或其它肿瘤密切相关；人锌指蛋白139，148，151可引起血液性恶性疾病如白血病、非何杰金氏淋巴瘤(Genomics 27：259-264，1995)。因此推测，人锌指蛋白9与以下但不限于以下疾病有关：实体瘤如甲状腺腺瘤，血液性恶性疾病如白血病、非何杰金氏淋巴瘤，Williams综合症，裂手裂脚症，贝魏二氏综合症，其它肿瘤如成神经细胞瘤、结肠癌、乳腺癌等等。

编码锌指蛋白的多聚核苷酸，及其所编码的锌指蛋白的发现为研究细胞在正常及病理条件下的分化、生长、增殖的生理生化过程提供了一种方法，也为诊断、治疗与细胞分化生长增殖紊乱而造成的疾病包括癌症提供了一种新途径。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人锌指蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人锌指蛋白9.35。