[发明专利]一种新的多肽——人富含亮氨酸、脯氨酸的蛋白聚糖44和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人富含亮氨酸、脯氨酸的蛋白聚糖44，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

基底膜是位于上皮、内皮细胞、周围肌肉细胞、脂肪细胞及周围神经系统的一层薄的细胞外膜，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖是的基底膜主要成分。蛋白聚糖是由一或多个粘多糖侧链结合于核心蛋白的大分子复合物。硫酸乙酰肝素蛋白聚糖具有多种作用，如：在基底膜表面建立离子屏障、结合其它基底膜复合物、参与接触点的细胞粘着及稳定性的维持。

基底膜分子、基底膜蛋白聚糖的研究一直是我们实验室工作的重点之一。按照传统，这些分子根据他们具有的粘多糖链被分为两个家族：乙酰肝素硫酸盐蛋白聚糖家族(HSPG)和软骨素硫酸盐蛋白聚糖(CSPG)家族，其中HSPG家族中被了解的最透彻和最具有特点的是一个富含亮氨酸、脯氨酸的蛋白聚糖，我们把它命名为perlecan，它最早是从Engelbreth-Holm-Swarm肿瘤中被分离[Hassell，J.R.，Robey，P.G.，Barrach，H.J.，Wilczek，J.，Rennard，S.I.，and Martin，G.R.(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.77，4494-4498]。

Leprecan的核心蛋白和软骨素硫酸盐(CS)相连，它可以免疫定位在基底膜上。我们使用一种由家鼠L-2细胞分泌的单克隆抗体进行研究，确定该核心蛋白的分子量在100kDa左右，Leprecan完整的开放阅读框长2.541kb，但是cDNA相应的编码区长2.183kb，剩下的序列由0.325kb的未翻译区和一个poly A尾巴组成[McCarthy，K.J.，Accavitti，M.A.，and Couchman，J.R.(1989)J.Cell Biol.109，3187-3198]。利用多克隆抗血清Rb4127作为探针进行进一步研究时，我们分离了10个单独的克隆，每个克隆长约0.5kb，10个克隆之间没有重复序列。然而，其中的一个克隆，P2，在3′末端有一个终止密码和多腺苷酸化信号，表明这个分离的cDNA可能编码了蛋白聚糖核心蛋白的羧基末端。而且通过蛋白聚糖数据库的比较，显示P2克隆和蛋白聚糖富含亮氨酸重复子小家族(SLRP)几个成员的有限区域有同源。

Leprecan核心蛋白由727个氨基酸组成，在Arg38有一个RGD细胞附件，表明该区域是作为一个细胞粘合受体的整合蛋白家族结合点存在。Leprecan核心蛋白不但具有4个糖基化点，而且在氨基末端还具有内质网修补信号--KDEL，这表明它可能参与细胞分泌过程，并和其他分泌基质分子互相影响[Munro，S.，andPelham，H.R.(1987)Cell 48，899-907]，Leprecan分泌物中KDEL信号的缺失对定位诱变研究具有重大意义。

二级结构显示Leprecan由15个短的alpha螺旋区域以及散布在螺旋区域中的bata折叠共同组成，由此推测Leprecan为一球形结构。在这个二级结构中，粘多糖结合点，糖基化点和KDEL修复信号都位于alpha螺旋区域的分界线之外，这样它们就更易于被结合。

Leprecan在脉管系统以及和平滑肌相连的所有器官的基底膜上都有表达，如心肌、骨骼肌、中枢神经系统(大脑皮层和小脑)、大肠、气管、皮肤、肝脏和肾脏等。

本发明新的多肽与鼠富含亮氨酸、脯氨酸的蛋白聚糖在蛋白水平上有91％的同一性和95％的相似性，且具有相似的生物学功能和结构，因而被命名为人富含亮氨酸、脯氨酸的蛋白聚糖44。

由于如上所述人富含亮氨酸、脯氨酸的蛋白聚糖44蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人富含亮氨酸、脯氨酸的蛋白聚糖44蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人富含亮氨酸、脯氨酸的蛋白聚糖44蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人富含亮氨酸、脯氨酸的蛋白聚糖44以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人富含亮氨酸、脯氨酸的蛋白聚糖44的多核苷酸的重组载体。