[发明专利]一种新的多肽——人锌指蛋白10.56和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人锌指蛋白10.56，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

真核基因的转录调控对于基因的正常表达及发挥生物学功能是十分重要的，通常由转录调控因子来完成这一过程。转录调控因子在生物体内参与决定基因在何种组织及何种发育阶段开始转录，编码这类蛋白的基因如发生突变，不但该基因自身不能正常表达，而且受其调节的许多基因也不能正常的进行转录与表达。转录因子对基因表达的调控主要通过转录因子与特定的DNA序列结合、转录因子间的相互作用及转录因子与常规转录机构的相互作用在完成。根据结构基序的不同，已知的DNA结合蛋白可主要分为两类：含有螺旋-转角-螺旋基序的蛋白及锌指蛋白[Kamal Chowdhury，Heidi Rohdewohld et al.，Nucleic AcidsResearch，1988，16：9995-10011]。

锌指蛋白为编码锌离子介导的核苷酸结合蛋白多基因家族中的成员，锌指蛋白按其结构特征又可分为各种不同的家族。人们已从酵母、果蝇、鼠及人等多种生物体中分离得到了各种类型的锌指蛋白。果蝇Kruppel基因类似的锌指蛋白分布最为广泛，且在生物体内有着重要的生物学功能。这些基因均含有锌指蛋白的特征性连续重复的C2-H2锌指蛋白结构域。研究发现，这些蛋白与基因的转录活化及抑制有关，这些蛋白的表达异常将引发各种发育紊乱性疾病、各种肿瘤的发生、各种遗传性疾病及免疫系统疾病[Kamal Chowdhury，Heidi Rohdewohld etal.，Nucleic Acids Research，1988，16：9995-10011]。

所有的锌指蛋白Kruppel家族的成员均含有28-30个氨基酸长的保守的指重复序列(F/Y)XCXXCXXXFXXXXXLXXHXXXHTGEKP，其中一些特定的氨基酸残基位点为高度保守的。这一序列在很多不同的锌指蛋白中均含有多个拷贝，其拷贝数不同(锌指个数不同)则功能也不同。锌指蛋白与不同长度的DNA的结合依赖于指结构的数量，多指结构可能与复合物的结合稳定性有关，而复合物是RNA聚合酶转录的作用位点。研究发现，许多锌指蛋白的锌指结构域相互连接区域也是高度保守的，这一区域通常含有下列序列：His-Thr-Gly-Gly-Lys-Pro-(Tyr，Phe)-X-Cys，其中组氨酸与半胱氨酸为金属离子的结合位点，而X为可变氨基酸残基。这一区域对于锌指结构的形成是必需的，指结构的数量将直接影响锌指蛋白与不同长度的DNA结合，且多指结构与复合物的结合稳定性有关[Jeremy M.Berg，Annu.Rev.Biophys.Chem，1990，19：405-421]。

人类T细胞白血病病毒I(HTLV-1)是成熟T细胞白血病的病原体，它能导致典型的痉挛性截瘫[Hinuma，Y.etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1981，78：6476-6480][Poiesz，B.etal.，Nature，1981，294，268-271][Osame，M.et al.，Lancer，1985，1031]。HTLV-1是通过寄主的核因子调节其5端长重复序列(LTR)表达的。LTR包含三个区域，其中一个叫U5RE区域。该区域能结合一个蛋白叫HUB1，它能在转录水平上抑制LTR的表达[Koichi，O.et al.，Nucleic Acids Res，1997，25(24)

：5025-5032]。

HUB1有671个氨基酸残基，包含5个锌指蛋白的指结构域，以及1个Kruppel类盒(KRAB)结构域。HUB1的锌指结构位于C末端的第518氨基酸和657氨基酸之间，该锌指蛋白属于上文所诉的Kruppel家族类型中的抑制蛋白，是Kruppel家族的新成员。HUB1的KRAN结构域位于196氨基酸和261氨基酸之间，富含带电核的氨基酸，大部分位于靠近Kruppel锌指结构和调节转录抑制的起始位点附近的N末端[Bellefroid，E.J.et al.，DNA，1989，8：377-387]。HUB1的Kruppel类盒结构域属于KRAB中的A类型：32-75和403-443之间富含脯氨酸，98-185之间富含亮氨酸，470-503之间富含甘氨酸。