[发明专利]一种新的多肽——人氯离子通道蛋白13.31和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人氯离子通道蛋白13.31，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

细胞与周围环境以及其他细胞之间每时每刻都在进行着物质交换，其交换的途径是多样性的，离子通道(ion channel)就是其中一种交换方式，它通过改变质细胞膜的离子通透性，从而调节细胞中的物质浓度。离子通道是分布在细胞膜上的蛋白，涉及到细胞的动态平衡和电脉冲结合转移的保持，这种功能在肌肉收缩、神经元信号传递和细胞胞外分泌等细胞事件中尤为重要(Hille，B.(1992))。根据离子通道控制机制的不同，可将离子通道区分为两中主要的类型：配体控制(ligand-gated)的和电压控制(voltaged-gated)的。这两种不同类型的离子通道蛋白在结构上也显示出较大的差异。

氯离子通道家族(chloride channel，ClC)是目前为止离子通道中研究最为透彻的一种通道蛋白家族。较为典型的基因如ClCN4属于氯离子通道家族，它位于X性染色体上，其序列中含有260个氨基酸残基，结构上存在12个疏水性区域。对其在各种机体组织中表达量进行分析比较显示，CLCN4的表达在骨骼肌中显示出较高的水平，而在心脏和脑中的表达水平比较低。

目前已经有多种离子通道基因被发现与某些疾病有关，在氯离子通道家族中也如此。比如肌强直症(Myotonias)是一种遗传性的异质性肌紊乱，其症状是骨骼肌肉僵硬并且容易损伤(Ptacek，L.J.，Johnson，K.J.(1993))，对人的Thomsen和Becker型肌强直症进行研究，发现其离子通道ClC-1基因发生了突变，从而导致异质性肌紊乱的发生(Koch，M.C.；Steinmeyer，K.et al.)。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人氯离子通道蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人氯离子通道蛋白13.31。

由于如上所述人氯离子通道蛋白13.31蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人氯离子通道蛋白13.31蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人氯离子通道蛋白13.31蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人氯离子通道蛋白13.31以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人氯离子通道蛋白13.31的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人氯离子通道蛋白13.31的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人氯离子通道蛋白13.31的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人氯离子通道蛋白13.31的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人氯离子通道蛋白13.31的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人氯离子通道蛋白13.31异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中1091-1456位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-2436位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。