[发明专利]一种新的多肽——磷酸脂酶13.97和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——磷酸酯酶13.97，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

DNA聚合酶是生物基因组复制和修复所必须的酶(Komberg，A.andBaker，T.1992 DNA replication 2^nd edition WH Freeman.San Francisco)。尽管它们的功能是一致的，但是这些酶以不同的方式存在时，是非常不一样的(Mushegian，A.R.and Koonn，E.V.1996Proc.Natl ACAD.Sci.USA.93 10268-10273)。DNA聚合酶按照它们大亚基或催化核甘酸聚合反应的结构域序列的相似性，可以分为四个不同的DNA聚合酶超家族。

DNA聚合酶蛋白质序列分析发现，原来未确认的保守结构域属于两个不同的磷酸酯酶超家族。细菌DNA聚合酶III的α亚基和两个不同的X DNA聚合酶家族蛋白都包含一个N端结构域，该结构域定义为一个新的具有酶活力的超家族，取名为聚合酶和组氨酸磷酸酯酶PHP。PHP超家族催化位点由四个包含保守组氨酸残基的基元序列，这些组氨酸残基可能参与依赖金属原子的磷酸酯的水解催化反应。PHP结构域在所有的细菌DNA聚合酶IIIα亚基中是高度保守的，但是在蛋白细菌和霉浆菌中，该保守的基元序列是不同的，暗示酶活性的丧失。另一个保守结构域，发现于古细菌DNA聚合酶II的小亚基和真核生物DNA聚合酶α、δ亚基，都属于类似钙调磷酸酶磷酸酯酶超家族，该家族集合了各种各样的磷酸酯酶和核酸酶。在古细菌DNA聚合酶亚基中，磷酸酯酶的酶活性需要保守基元序列的完整性，但是在它们的真核生物同系物中，情况通常是相反的。有一个假说提出细菌和古细菌DNA聚合酶本身就具有磷酸酯酶活性，因为在核甘酸聚合过程中出现了水解的焦磷酸。有人提出，焦磷酸水解是推动核甘酸聚合的动力。磷酸酯酶结构域以及断的催化基元序列可能是DNA聚合酶全酶其它亚基的一个变构物，调节功能域。如果是这样的话，焦磷酸水解可以被一个停滞的磷酸酯酶水解，并且是细菌PHP超家族的成员。

细菌DNA聚合酶III的α亚基和DNA聚合酶X家族成员有统计学意义的序列相似性，即都包含PHP结构域。这两个家族的球状结构域有极大的相似性。该球状结构域有别于已知的X家族核甘酸转移酶结构域，并且可能和细菌DNA聚合酶III的功能有关系。聚合酶反应包括单个核甘酸从脱氧核甘酸三磷酸转移至一个引物，伴随一个无机磷酸的失去。PHP结构域可能和负责核甘酸聚合的功能域融合在一起担当磷酸化任务。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与磷酸酯酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为磷酸酯酶13.97。

由于如上所述磷酸酯酶13.97蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的磷酸酯酶13.97蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新磷酸酯酶13.97蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——磷酸酯酶13.97以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码磷酸酯酶13.97的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码磷酸酯酶13.97的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产磷酸酯酶13.97的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——磷酸酯酶13.97的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——磷酸酯酶13.97的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与磷酸酯酶13.97异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；