[发明专利]一种新的多肽——人脂蛋白前体蛋白信号肽13.42和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人脂蛋白前体蛋白信号肽13.42，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

脂蛋白是一类由蛋白和各种脂肪酸和类固醇构成的结合蛋白。蛋白和类固醇靠弱的非共价键结合在一起的，而另一些脂蛋白则是由蛋白与脂类靠共价键结合。脂蛋白可以根据其蛋白质组成分为三类，核蛋白类(如凝血酶至活酶)、磷蛋白类(如卵黄中的脂磷蛋白)和单纯蛋白类(如血浆脂蛋白和脑蛋白脂)。脂蛋白在机体的作用十分重要。例如，在血液中的脂类有一部分就是由血浆脂蛋白传送的。

在细胞中，对膜蛋白进行脂类的共价修饰是一个普遍的现象。事实上，细胞膜的蛋白都是脂蛋白。它们与细胞膜的磷脂层相互作用形成膜结构。

膜脂蛋白的合成与修饰的过程在原核生物中研究的较清楚。在原核生物中，膜脂蛋白首先作为一个蛋白前体被合成出来。这个前体蛋白的N端包含一个信号肽。在蛋白分泌出质膜的过程中，相继会发生N端的半胱氨酸的修饰和信号肽的切除这两个过程。这个过程是在一个保守的区域中发生的。而将来不经过脂修饰的蛋白的信号肽则不具有这个保守序列。看来，这个保守序列是成熟蛋白进行脂修饰与否的分选信号。[Protein Eng 1989 May；2(7)：531-4]之后末端的半胱氨酸残基N-乙酰化，蛋白转移至外膜，并共价连接到肽聚糖层。信号肽在被信号肽酶II所剪切的同时也被水解。[J Bioenerg Biomembr 1990 Jun；22(3)：451-71]上述膜脂蛋白的合成与修饰的过程在许多的原核生物和原核生物中都有发现，具有较普遍的意义。

在信号肽剪切过程中，信号肽酶II识别信号肽上一段保守的序列，并剪切半胱氨酸残基的与甘油脂-脂肪酸脂相连的上游片断。这一段保守序列是：

DERK(6)-[LIVMFWSTAG](2)-[LIVMFYSTAGCQ]-[AGS]-C其中，C是脂的连接位点，并必须位于15到35个残基之间。在序列的前七个氨基酸中必须有一个赖氨酸或者精氨酸。

在脑中，阿朴脂蛋白与阿尔兹海默氏症相关。高密度脂蛋白可以将脑中存在的多余的胆固醇除去，保持淀粉海量维持在正常水平。这类脂蛋白的表达失常会导致阿尔兹海默氏症，胆固醇在脑内沉积，导致脑瘤等。许多类型的血浆脂蛋白是由肝脏形成的，因此如果脂蛋白前体蛋白的信号肽的合成受阻，会导致生成的蛋白不能正确的脂化，而导致脂蛋白的合成代谢紊乱，对血浆脂蛋白来说，其传送脂类的功能就会受到影响，从而导致一系列的肝脏疾病，如外源/内源性脂血症、家族性高胆固醇血症、胆固醇脂储藏病、脂肪肝等。严重的脂肪肝还会导致肝癌。脂蛋白的合成代谢紊乱还会导致冠心病等疾病。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与人脂蛋白前体蛋白信号肽的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人脂蛋白前体蛋白信号肽13.42。

由于如上所述人脂蛋白前体蛋白信号肽13.42蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人脂蛋白前体蛋白信号肽13.42蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人脂蛋白前体蛋白信号肽13.42蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人脂蛋白前体蛋白信号肽13.42以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人脂蛋白前体蛋白信号肽13.42的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人脂蛋白前体蛋白信号肽13.42的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人脂蛋白前体蛋白信号肽13.42的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人脂蛋白前体蛋白信号肽13.42的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人脂蛋白前体蛋白信号肽13.42的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人脂蛋白前体蛋白信号肽13.42异常相关的疾病的方法。