[发明专利]一种新的多肽——脯氨酸富含γ羧基谷氨酸蛋白9.13和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——脯氨酸富含γ羧基谷氨酸蛋白9.13，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

脂可溶性抗出血维生素以来[Dam，H.1935.Biochem.J.29，1273-1285]，维生素K止血功能的分子基础已经研究得比较深入。γ羧基谷氨酸残基只表达于牛的凝血素中而不表达于用抗凝血剂和维生素K拮抗物双羟香豆素处理的动物凝血素中，这表明维生素K是作为凝血素特定谷氨酰基后翻译γ羧基化的辅助因子[Nelsestuen，G.L.，Zytokovicz，T.H.&Howard，J.B.1974.J.Biol.Chem.249，6347-6350]。在大量循环血浆糖蛋白的N末端48个氨基酸残基都有同源的包括9-12个γ羧基谷氨酸残基的结构域。钙离子是γ羧基谷氨酸正常结构域所必须的，并且在血管伤口的阴离子磷脂膜表面允许有依赖钙离子凝结因子的结合。

除了四种典型的依赖维生素K凝结因子以外，即凝血素和因子VII，IX和X，该蛋白家族包括拮抗因子，蛋白质C和S以及蛋白质Z。这些蛋白质γ羧基谷氨酸结构域中特异性谷氨酸残基被位于粗糙内质网上依赖维生素K的γ羧基酶在后翻译水平上修饰。

目前，生物学家又发现了两个新的γ羧基谷氨酸结构域包含蛋白家族成员-脯氨酸富含γ羧基谷氨酸蛋白1(PRGP1)和脯氨酸富含γ羧基谷氨酸蛋白2(PRGP2)。这两个蛋白质是在细胞质区域富含脯氨酸的整合膜蛋白。该富含脯氨酸区域包括WW结构域结合基元，PPXY[Chen，H.I.&Sudol，M.1995.Proc.Natl.Acad.Sci.USA92，7819-7823]。WW结构域是包括SH2，SH3和PH结构域蛋白组成的蛋白质模型家族的新成员。此外，这些脯氨酸富含区包括序列PXXP的几个拷贝，和一个SH3结构域结合基元[John D.Kulman，Jefe E.Harris etal.，1997.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94(17)9058-9062]。在各种细胞骨架组成和信号分子中发现的SH3、WW结构域的交互作用暗示新发现的PRGP1和PRGP2可能也有类似功能。

与γ羧基谷氨酸结构域高寒蛋白质家族其他成员不同的是，PRGP1缺乏一个明显的信号肽段。在成熟蛋白中的一个转膜区域可能能将PRGP1直接引导至内质网腔。另外，PRGP1在转膜区域的C末端带有相对较多的正电荷。

PRGP1和PRGP2都表达于许多不同的组织和器官，其中PRGP1在脊髓中表达最多。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与脯氨酸富含gama羧基谷氨酸蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为脯氨酸富含gama羧基谷氨酸蛋白9.13。

由于如上所述脯氨酸富含gama羧基谷氨酸蛋白9.13蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的脯氨酸富含gama羧基谷氨酸蛋白9.13蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新脯氨酸富含gama羧基谷氨酸蛋白9.13蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——脯氨酸富含gama羧基谷氨酸蛋白9.13以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码脯氨酸富含gama羧基谷氨酸蛋白9.13的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码脯氨酸富含gama羧基谷氨酸蛋白9.13的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产脯氨酸富含gama羧基谷氨酸蛋白9.13的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——脯氨酸富含gama羧基谷氨酸蛋白9.13的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——脯氨酸富含gama羧基谷氨酸蛋白9.13的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与脯氨酸富含gama羧基谷氨酸蛋白9.13异常相关的疾病的方法。