[发明专利]一种新的多肽——人K－ras原癌基因蛋白10.67和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人K-ras原癌基因蛋白10.67，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在生物体内存在着很大一类蛋白，其通过与活化的酪氨酸激酶受体相作用，将信号传导至细胞核内以调节相关基因的表达，影响细胞的增殖与分化，该类蛋白组成了一独立的蛋白家族即Ras蛋白家族。Ras蛋白是ras基因的转录表达产物，其通过共价键与异戊烯基连接使之锚定在质膜的胞质侧面上，进而活化一系列与之相关的蛋白活性，以传导体内各种信号分子，调控细胞的发育与生长。Ras蛋白不是蛋白激酶，其在体内作为一种分子开关，与鸟苷酸结合，特别是与GDP、GTP结合发挥其生物活性。当其与GTP结合时即活化了Ras，而与GDP结合时则钝化了Ras的活性。

研究发现，活化的Ras蛋白向其下游发放信号是以脉冲方式进行的。在细胞内还存在着大量的相关的蛋白，如Raf蛋白、鸟苷酸释放因子等。Raf蛋白是一种丝/苏氨酸蛋白激酶，催化蛋白丝/苏氨酸位点的磷酸化。当Ras蛋白被激活后，位于细胞溶质中的Raf蛋白即趋向到质膜胞内侧并与Ras蛋白结合，Ras蛋白即激活Raf蛋白在体内的活性。Raf蛋白活化后在向下游传递信号的过程中即包含了许多丝/苏氨酸残基磷酸化级联反应，其中最重要的一种是有丝分裂原活化蛋白激酶。这些激酶被众多细胞外诱导细胞增殖和分化的信号激活，以调控着体内各种生理学过程的进行。近年的研究发现，在一些肿瘤细胞中，异常的Ras蛋白，在其蛋白序列的12位或61位残基的点突变，将抑制蛋白本身及由GAP刺激的GTP酶活性，即不能使Ras-GTP转变成Ras-GDP，从而导致Ras蛋白在体内长期处于活性状态，不停地向下游发放信号，即引起体内细胞的异常增殖。

人们已从不同的生物体内克隆得到了多种不同的Ras蛋白家族的成员。1987年，Kahn等人又从人中克隆得到了一Ras蛋白家族的新成员----c-K-ras原癌基因，该基因的突变体在人的多种肿瘤细胞中均有表达，其在肿瘤形成、恶化前及恶化后等多种阶段发挥着重要的调控作用。由此可知，该c-K-ras原癌基因所编码的蛋白在生物体内与多种组织及细胞的肿瘤及恶性疾病的发生均密切相关，该蛋白的突变或表达异常将导致生物体相关组织及细胞发育及分化的异常，是相关组织肿瘤及癌症发生的主要原因之一[Kahn S.，Yamamoto F.et al.，1987，Anticancer Res，7：639-652]。

由上可知，c-K-ras原癌基因所编码的蛋白是Ras蛋白家族的一个新成员，该蛋白在生物体内作为一种分子开关调控着相关基因在体内的表达，进而影响细胞的分化及增殖。该蛋白的突变或表达异常将导致蛋白在体内的作用异常，进而影响相关的生物学过程的进行。该蛋白在生物体内通常与各种发育紊乱性疾病、相关组织的肿瘤及癌症等疾病的发生密切相关。该蛋白还可用于诊断及治疗上述各种相关的疾病。

通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本发明的多肽的表达谱与K-ras原癌基因蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人K-ras原癌基因蛋白10.67。

由于如上所述人K-ras原癌基因蛋白10.67蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人K-ras原癌基因蛋白10.67蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人K-ras原癌基因蛋白10.67蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人K-ras原癌基因蛋白10.67以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人K-ras原癌基因蛋白10.67的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人K-ras原癌基因蛋白10.67的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人K-ras原癌基因蛋白10.67的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人K-ras原癌基因蛋白10.67的抗体。