[发明专利]一种新的多肽——鼠的同AMPA受体相互作用的蛋白GRIP12.54和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——鼠的同AMPA受体相互作用的蛋白GRIP12.54，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

Shake型的钾离子通道和NMDA受体的C末端被认为通过同突触的细胞骨架蛋白PSD-95/SAP90的相互作用涉及亚细胞的靶作用。PSD-95/SAP90的结构在它的N末端区域有被最新命名为PDZ区域(Cho，K，O.，Neuron 9，929-942，1992)的三个重复单元。PDZ是以含有三个基元PSD-95，Dig-A，ZO-1的蛋白质命名的。PDZ区域是一个含有90个氨基酸的基元，它在其它的PSD-95/SAP90家族，和包括酪氨酸磷酸化酶和NOS(nitric oxide synthase)等蛋白质中存在。PDZ区域通过蛋白质的C末端的相互作用调节蛋白质和蛋白质之间的相互作用。

最近我们从鼠的海马的互补的DNA库中分离到了一个同GluR2蛋白相互作用的蛋白质——GRIP(同谷氨酸受体相互作用的蛋白质)。它有6kb长，有一个3336bp的开放阅读框架，分子量约为120350。全长的GRIPcDNA编码七个PDZ区域。每一个PDZ区域含有PDZ区域中的保守的GLGF的重复序列。同其它的蛋白质PSD-95/SAP90和NOS相比较，它没有催化区域。由此可知，GRIP可能同AMPA受体蛋白交联，或者起调节子的作用，或者起着脚手架蛋白的作用，使AMPA受体依附与其它的蛋白质。

AMPA谷氨酸受体在中央神经系统中调节大多数的兴奋突触传送(Hollmann.M，Annu.Rev.Neurosci.17，31-108，1994)，在潜在的学习和记忆中的突触可塑性中有重要的作用(Nicoll，R.A，Nature 377，115-118，1995)。AMPA受体是四个同源亚基(GluR1-4)的异数复合体。

利用反GRIP融合蛋白抗体，我们发现在包括嗅球，大脑皮层，海马，小脑，脊髓的各种脑区域中表达。

实验表明，丝氨酸残基在调节GRIP-GluR2的联系中的蛋白质磷酸化中起着重要的作用。GRIP存在于兴奋突触中，它在AMPA的受体的突触靶作用中有重要的作用。

总之，GRIP蛋白含有七个PDZ区域，它同PSD-95/SAP90家族的PDZ的区域有着相似的功能——交联AMPA受体，同细胞骨架蛋白和信号传导酶相联系。在大脑中兴奋突触的AMPA受体的聚类中有重要的作用。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与鼠的同AMPA受体相互作用的蛋白GRIP的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为鼠的同AMPA受体相互作用的蛋白GRIP12.54。

由于如上所述鼠的同AMPA受体相互作用的蛋白GRIP12.54蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的鼠的同AMPA受体相互作用的蛋白GRIP12.54蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新鼠的同AMPA受体相互作用的蛋白GRIP12.54蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——鼠的同AMPA受体相互作用的蛋白GRIP12.54以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码鼠的同AMPA受体相互作用的蛋白GRIP12.54的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码鼠的同AMPA受体相互作用的蛋白GRIP12.54的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产鼠的同AMPA受体相互作用的蛋白GRIP12.54的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——鼠的同AMPA受体相互作用的蛋白GRIP12.54的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——鼠的同AMPA受体相互作用的蛋白GRIP12.54的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。