[发明专利]一种新的多肽——人成视网膜细胞瘤结合蛋白34.54和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人成视网膜细胞瘤结合蛋白34.54，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

成视网膜细胞瘤是一种在婴幼儿期发生于一侧或双侧眼睛未分化视网膜中的肿瘤。在这一年龄组，它是一种最高发的眼部肿瘤，发病率为1/12000。正常的成视网膜细胞瘤基因具有结合DNA的功能，可控制着细胞周期G1向S期的转换。该基因两个等位基因功能的丧失可引起肿瘤。遗传型和非遗传型的成视网膜细胞瘤是由肿瘤抑制基因RB-1的突变引起的(Lee，W.-H.et al.Humanretinoblastoma susceptibility gene：cloning，identification and sequence.Science 235，1394-1399(1987))。

成视网膜细胞瘤(RB)基因是一种肿瘤抑制基因。RB等位基因都发生缺失或是失活是携带突变的RB基因家族形成成视网膜细胞瘤以及骨肉瘤的关键性限速步骤。在其他人类肿瘤中也发现存在有失活的RB基因。RB功能的损伤与控制细胞增殖的损伤相关，介入野生型的RB能够抑制细胞增长与肿瘤发生能力。因而，确定参与或控制RB蛋白功能的因子对于了解细胞周期以及肿瘤发生都是至关重要的。近来发现了一种新的基因：RBP2，它编码人成视网膜细胞瘤结合蛋白，在人类主要的肝癌中过量表达，对TGF-betal的生长抑制效应产生拮抗。RBP2蛋白与其他成视网膜细胞瘤结合蛋白具有同源性，并含有Rb-结合的特征序列模板：LXCXE，还具有两个酪蛋白激酶II磷酸化位点。RBP2/Rb复合物中不含有E2F-1，当RBP2持续地过量表达，细胞将被迅速转化并形成肝癌样肿瘤。RBP2通过与Rb作用对TGF-betal的生长抑制效应产生拮抗表明它在转化过程中是极为重要的(Joseph T.Woitach，Minghuang Zhang，Chien-Hua Niu & Snorri S.Thoreirsson，Nature Genetics 19，371-374(1998))。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与人成视网膜细胞瘤结合蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人成视网膜细胞瘤结合蛋白34.54。 

由于如上所述人成视网膜细胞瘤结合蛋白34.54蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人成视网膜细胞瘤结合蛋白34.54蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人成视网膜细胞瘤结合蛋白34.54蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人成视网膜细胞瘤结合蛋白34.54以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人成视网膜细胞瘤结合蛋白34.54的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人成视网膜细胞瘤结合蛋白34.54的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人成视网膜细胞瘤结合蛋白34.54的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人成视网膜细胞瘤结合蛋白34.54的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人成视网膜细胞瘤结合蛋白34.54的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人成视网膜细胞瘤结合蛋白34.54异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。