[发明专利]抗变形链球菌粘附的多肽混合物

说明书

本发明涉及抗细菌粘附的多肽，尤其是关于抗变形链球菌粘附的多肽混合物及其在制造防龋产品中的应用。

实验表明，变形链球菌(streptococcus mutans)是主要的致龋细菌，主要有三个原因：1.其产酸力强，产酸迅速，且耐酸。2.能合成细胞外多糖和细胞内多糖，从而介导变形链球菌在牙面的粘附，参与菌斑基质的形成，促进菌斑成熟。3.对牙面有很高的亲和力，并具有致光滑面龋的能力。变形链球菌表面蛋白SAI/II是目前研究最多且被认为是变形链球菌较肯定的粘结素，研究显示SAI/II可与牙面获得性膜中的不同受体结合，如与粘蛋白，酸性蛋白等结合，这是致龋重要的步骤(刘天佳，《口腔疾病的微生物学基础》PP.53-55，人民卫生出版社，1999年)。

Kelly等在1990年(C.Kelly等，Archives of Oral Biology，35Suppl.，PP.33-38，1990)对变形链球菌表面蛋白SAI/II(185000分子量)的蛋白基因SpaP进行了DNA测序。Kelly等又在1999年(C.Kelly等，NatureBiotechnology，17(1)，PP.42-47，1999)证实SAI/II155KD蛋白中对应于1025-1044氨基酸残基的多肽片段(称作P1025，分子量3001道尔顿)有较强的抗粘附功能，并通过丙氨酸取代的方法证明Q₁₀₂₅，E₁₀₃₇及FVLV_1041-1043是主要的结合位点，并用表面胞质团共振(Surface Plasmon Resouance)测定的方法证实，粘附抑制随P₁₀₂₅多肽浓度的增加而增加，在浓度为100μmd时有最强的抑制。但Kelly等没有给出最低的有效抑制浓度。

Kelly等用的P₁₀₂₅多肽是人工合成的19肽产物，纯化后纯度为97％。但实际应用时，这样高纯度的产物作为防龋产品中的原料应用，显然会使生产成本过高，而使实际防龋产品的开发无法实现。

为此，本发明的目的是提供一种抗变形链球菌粘附的P₁₀₂₅多肽混合物，其中19肽占75-96.99重量％，18肽及18肽以下的多肽占3.01-25重量％，该多肽混合物在极低的浓度下也具有抗变形链球菌粘附的功能，能大规模大范围应用于预防蛀牙的防龋产品的开发。

本发明提供一种P₁₀₂₅多肽混合物，该多肽混合物含有由20个氨基酸残基组成的19肽的P₁₀₂₅多肽及由19个或19个以下的氨基酸残基组成的18肽及18肽以下的P₁₀₂₅不完全多肽。其中19肽占75-96.99重量％，18肽及18肽以下的多肽占3.01-25重量％。P₁₀₂₅多肽混合物为白色或微灰黄色粉末或细颗粒，分子量为230-3001道尔顿，能溶于水，呈无色或微白色透明或轻微乳白状溶液。

19肽的P₁₀₂₅多肽的氨基酸顺序是：

Glu-Leu-Lys-Thr-Ala-Asp-Leu-Pro-Ala-Gly-Arg-Asp-Glu-Thr-Thr-Ser-Phe-Val-Leu-Val

本发明P₁₀₂₅多肽混合物的合成工艺

P₁₀₂₅多肽混合物的合成工艺采用常用的固相合成法(参见黄惟德等，多肽合成，科学出版社，1985年)。肽键的逐步延长是在不溶性的树脂小圆珠上进行，合成多肽的羟基一端以共价键先结合到树脂上，第二个氨基酸的氨基用叔丁基氧甲酰基保护后，以二异丙基碳二亚胺为缩合剂，接在第一个氨基酸的氨基上，重复这个步骤，使肽链按照上述P₁₀₂₅顺序延长合成多肽。多肽合成到最后一步时，把树脂悬浮在无水三氟乙酸中，通入干燥HBr，使多肽从树脂上解离下来，同时一些保护基也被除去，得到的产物即为本发明P₁₀₂₅多肽混合物不作提纯，直接冷冻干燥备用。

P₁₀₂₅多肽混合物合成工艺流程图参见图1。