[发明专利]一种新的多肽——alpha－1蛋白酶抑制子Ⅲ－30.91和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——alpha-1蛋白酶抑制子III-30.91，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

α-1抑制子III是一个丰富的鼠的血浆蛋白，它是含有硫醇酯的蛋白酶抑制子家族的一个成员，此家族同时包括α-1和α-2微球蛋白(Gauthier，F.，Hope-Seyler’sZ.Physoil.Chem.359，987-992，1978)。

在表达载体λgt11构建的鼠肝的cDNA文库中，我们得到了一个2.5kb长的cDNA克隆——AF7，它编码785个氨基酸。通过序列分析表明，它同α-1抑制子III有89％的同源性，是α-1抑制子III的变体家族的一个成员。它含有2517个碱基对，有一个聚酰胺尾巴跟随的129个核苷酸的3’未翻译区域。它的3’未翻译区域是高度保守的。此外，它的硫醇酯活性位点，11个半胱氨酸残基和8个N-linked糖基化位点也是保守的(Lloyd PaulAiello，J.Bio.Chem，263(8).4013-4022，1988)。

实验表明，在注射松脂后的急性期中，α-1抑制子III的mRNA会减少4-5倍，此水平在初始的发炎刺激后，将保持48小时。

在部分切除肝的手术中，同没有处理的肝相比较，α-1抑制子III的表达也会减少6倍左右，它将保持36小时。在胎儿的肝中不含有α-1抑制子III，只有当从分娩到出生20天期间，才出现α-1抑制子III。40-45天后，其水平达到成人的程度。由此可知，α-1抑制子III在胚胎和发育期间，有两个调节点，一个是出生时，另一个是3周后。

由此可知，α-1抑制子III不但在急性期的应答中，而且在肝的发育中表达中起调节作用。α-1抑制子III是发育调节相关的蛋白质，它的表达主要是在转录过程中起调节作用。

本发明人的多肽与α-1蛋白酶抑制子III在氨基酸水平上分别有34％和49％的相同性与相似性，并具有相似的结构特征，同属于蛋白酶抑制子家族。如果其表达异常或突变，将影响到肝的发育。同时影响它在急性期中的调节作用。故命名为alpha-1蛋白酶抑制子III-30.91。

由于如上所述alpha-1蛋白酶抑制子III-30.91蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的alpha-1蛋白酶抑制子III-30.91蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新alpha-1蛋白酶抑制子III-30.91蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——alpha-1蛋白酶抑制子III-30.91以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码alpha-1蛋白酶抑制子III-30.91的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码alpha-1蛋白酶抑制子III-30.91的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产alpha-1蛋白酶抑制子III-30.91的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——alpha-1蛋白酶抑制子III-30.91的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——alpha-1蛋白酶抑制子III-30.91的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与alpha-1蛋白酶抑制子III-30.91异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中84-929位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-2403位的序列。