[发明专利]一种新的多肽——人细胞周期蛋白K9.02和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人细胞周期蛋白K9.02，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

真核细胞的发育取决于依赖蛋白激酶家族(CDK)的细胞周期蛋白在合适的时间活化(Norbury，C.Nurse，P.(1992).Animal cell cycles and their control.Ann.Rev.Bio ch em.61，441-470)。CDK家族成员有同源序列，该序列包括在所有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶中发现的氨基酸残基亚型，这些氨基酸残基是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化活性所必须的(Meyer so n，M.，et al.，&Tsai，L.，H.(1992).A familyof human cdc2 related protein kinases.EMB O J.11，2909-2917)。CDKs通过与正向调节分子结合而被激活，这个正向调节分子叫细胞周期蛋白。细胞周期蛋白取名来自于它们的细胞周期性积累和破坏，这些变化是和海洋脊椎动物和两栖动物胚胎卵裂和分化伴随产生的。细胞周期蛋白的序列是非常多样性的，只有大约100个氨基酸区域处是同源的，这个区域现在定义为细胞周期蛋白盒(Pines，J.&Hunter，T.(1989).Isolation of a human cyclin cDNA：Evidence forcyclin mRNA and protein regulation in the cell cycle and for interactionwith p34cdc2Cell 58，833-846)。在高等真核生物中，按照序列的相似形和在细胞周期中出现的时间，到目前为止细胞周期蛋白分为11个家族(A-K)(Hunter，T.&Pines，J.(1994).Cyclins and cancer 11：Cyclin D and CDKinhibitors come of ate.Cell 79，573-582)。

细胞周期蛋白K基因编码一个由357个氨基酸残基组成的蛋白质，该蛋白与细胞周期蛋白C和H最相关，细胞周期蛋白C和H通过连接和激活依赖细胞周期蛋白激酶(Cdks)磷酸化RNA聚合酶II的C末端结构域(CTD)来调节基本的转录。细胞周期蛋白K的mRNA广泛表达于成熟小鼠和人的精巢中，但在成人精巢和卵巢中正在发育的生殖细胞中表达最多。细胞周期蛋白K在体内与CTD激酶和Cdk激酶连接在一起，并且与RNAPII共免疫沉淀。因此，细胞周期蛋白K是转录细胞周期蛋白家族中一个新的成员，并且在调节Cdk和RNAPII中起着双重作用(Michael C.Edwards，Calvin Wong，Stephen J.Elledge(1998)Mol.Cell.Biol18(7)，4291-4300)。

在细胞周期蛋白折叠区域里，有22个氨基酸残基是一致的。这些氨基酸残基存在于N末端的细胞周期盒折叠内。有的起结构支撑作用，有的暴露在外形成两个显著的表面簇。一个表面簇是CDK2与细胞周期蛋白A的结合位点的一部分(Jeffrey，P.D.，etal.，&Payletich，N.(1995).Mechanism of CDK activationrevealed by the structure of a cyclinA-CDK2 complex.Nature 376，313-320)，另一个表面簇也是一个细胞周期蛋白的反应位点。精氨酸211和天门冬氨酸240形成一个显著的存在于疏水环境含有保守离子对的结构，该疏水环境是由周围的氨基酸残基酪氨酸199，丙氨酸212，亮氨酸214，缬氨酸215，缬氨酸236，异亮氨酸239，亮氨酸243，亮氨酸341，丙氨酸344和亮氨酸348。这些氨基酸残基在很多细胞周期蛋白里都是保守的疏水氨基酸，这表明该区域对于维持结构的稳定性起着至关重要的作用。精氨酸211的胍基团可以通过氢键与位于C末端转角2’的主链丝氨酸340和亮氨酸341的羧基基团发生结构域内部接触，这表明该残基可能对结构域之间的稳定起一定作用。

细胞周期蛋白盒折叠区域还广泛存在于各种调节分子，大多数是一些重要的转录因子，例如TF II B和肿瘤抑制基因产物pRB的B口袋结构和相关蛋白，p107。