[发明专利]一种新的多肽——枯草蛋白酶14.08和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——枯草蛋白酶14.08，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

枯草蛋白酶家族是丝氨酸蛋白酶家族中一个广泛的分支，它的催化活性由一种电子替代系统(charge relay system)提供，类似于丝氨酸蛋白酶的胰蛋白酶家族。它的催化三位点(天门冬氨酸、丝氨酸和组氨酸)附近的残基序列与胰蛋白酶相似位点附近的残基序列完全不同，因此这些序列可以作为区分枯草蛋白酶类的标志。

枯草蛋白酶家族的保守序列有：第一，(STAIV)-X-(LIVMF)-(LIVM)-D-(DSTA)-G-(LIVMFC)-X(2，3)-(DNH)(D是活性位点残基)，大部分枯草蛋白酶都有此位点，只有一小部分例外，其中，Asp-Asp-G1y三肽为底物结合位点提供一个高的负电子；第二，H-G-(STM)-X-(VIC)-(STAGG)-(GS)-X-(LIVMA)-(STAGCLV)-(SAGM)(H是活性位点残基)，除了aspA和ssal无此组氨酸活性位点；第三，G-T-S-X-(SA)-X-P-X(2)-(STAVC)-(AG)(S是活性位点残基)，nisP，tagC和S.marcesens胞外丝氨酸蛋白酶无此序列。

一个蛋白，如果包含以上三个序列的两个(或)以上，这个蛋白属于枯草蛋白酶家族的可能性即为100％。这些蛋白酶在活性位点附近序列的保守性说明了它们底物结构的相似性。

枯草蛋白酶家族与切割前蛋白和前激素的二元位点(由一对基本氨基酸残基构成的位点，主要有Lys-Arg和Arg-Arg等)及多元位点有关。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与枯草蛋白酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为枯草蛋白酶14.08。

由于如上所述枯草蛋白酶14.08蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的枯草蛋白酶14.08蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新枯草蛋白酶14.08蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——枯草蛋白酶14.08以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码枯草蛋白酶14.08的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码枯草蛋白酶14.08的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产枯草蛋白酶14.08的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——枯草蛋白酶14.08的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——枯草蛋白酶14.08的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与枯草蛋白酶14.08异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中471-857位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1274位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。