[发明专利]人血管生成素样蛋白和编码序列及其用途

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及新的编码人血管生成素样蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备方法。

血管新生(Angiogenesis)是恶性肿瘤的发生、演进与转移中的关键。已知血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial grouth factor，VEGF)及其受体(VEGFreceptor VEGF R)在肿瘤中起重要的作用。VEGF及VEGFR不仅在血管内皮细胞中高表达，而且在部分恶性肿瘤细胞也有表达，从而形成自泌及邻泌系统，支持并加速恶性肿瘤的形成与发展。

1996年以来，发现除VEGF/VEGFR系统以外，尚存在血管生成素(Angiopoietin Ang)及其受体TIE2系统，对血管新生具有极为重要的作用，并与VEGF/VEGFR系统有相互作用，共同调控血管的形成。Ang为一个家族，已发现的Ang家族有Ang1-5。其中Ang1有两种序列，ANGPT1 99.3.19登记，登记号NM001146，Ang-197.3.26登记，登记号U83508，Ang-3有两种序列。ANGPT3 99.5.7登记，NM_004673，Ang-1 99.5.24登记，AF074332。即共7个成员。此外，韩国在Genbank于1999年6月登记了一个血管生长素相关蛋白的cDNA(Angiopoietin-related Protein，登记号AF153606)，属未发表材料。

癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤，目前人们已越来越关注肿瘤的基因治疗。因此，本领域迫切需要开发研究具有抑癌作用的蛋白及其激动剂/抑制剂。

本发明的目的是提供一类新的血管生成素样蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。本发明的血管生成素样蛋白被命名为PP1158蛋白。

本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。

本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。

在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的血管生成素样蛋白多肽，它包含具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的多肽，或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的多肽。

在本发明的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性：(a)编码上述的血管生成素样蛋白多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码的多肽具有SEQ ID NO：2氨基酸序列。更佳地，该多核苷酸的序列选自下组：SEQ ID NO：3的编码区序列或全长序列。

在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。

在本发明的第四方面，提供了制备具有人血管生成素样蛋白活性的多肽的制备方法，该方法包含：(a)在适合表达血管生成素样蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有人血管生成素样蛋白活性的多肽。

在本发明的第五方面，提供了与上述的血管生成素样蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的10-800个核苷酸。

在本发明的第六方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明的血管生成素样蛋白多肽以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。

本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

在附图中，图1显示了本发明血管生成素样蛋白基因PP1158的抑癌作用。其中同时设立了空载体对照组(PCMV-Script)及非转化细胞对照。

图2显示了本发明的人血管生成素样蛋白(PP1158)的表达谱。

本发明采用大规模cDNA克隆转染癌细胞，在获得具有抑癌作用的基础上，经测序证明为新的基因，进一步得到全长cDNA克隆。DNA转染试验证明，本发明的人血管生成素样蛋白(PP1158)对癌细胞(肝癌细胞)具有抑制克隆形成的作用。