[发明专利]一种新的多肽——人阴离子交换蛋白10.01和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人阴离子交换蛋白10.01，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

阴离子交换是一种细胞内转运功能，能够调节细胞的pH和体积。阴离子交换蛋白组成一个功能上相近的蛋白家族，其功能的实现主要依靠调节细胞内的两种主要阴离子：Cl-和HCO3-。目前了解最为透彻的阴离子交换蛋白是band3蛋白(Jay D.，Cantley L.，1986)，它是一种血红细胞阴离子交换蛋白，是位于细胞膜上的糖蛋白。在血红细胞膜中，band3占据了总的膜蛋白重的25％。

Band3蛋白约含有900个氨基酸，位于细胞质区域的N末端约有400个残基，疏水性的C末端部分的500个残基包含了至少10个跨膜区域。Band3蛋白的细胞质区域为细胞骨架蛋白提供了结合位点，而整个跨膜区域主要负责阴离子的转运。在细胞质区域的C末端尾部，位于第一个跨膜区域之前，含有4个相连的带正电荷的残基，该段序列非常保守：F-G-G-[LIVM](2)-[KR]-D-[LIVM]-[RK]-R-R-Y。另外，在第5个跨膜区域上也有一段非常保守的区域：[FI]-L-I-S-L-I-F-I-Y-E-T-F-x-K-L，其中包含的Lys残基是DIDS的异硫氰酸盐基团的共价结合位点。

在质膜上，band3使碳酸氢盐与Cl-发生交换，从而增加了血的运载二氧化碳能力。阴离子交换机制通常是一种乒乓机制，阴离子结合位点位于膜的两侧。转运可以被许多的有机阴离子比如DIDS抑制，DIDS是一种阴离子交换抑制剂，能够通过共价结合到band3的外部(包含阴离子结合位点)来发挥其抑制作用。band3蛋白是对于血红细胞特异性的，在血红细胞以外的一些组织中，也存在结构和功能与band3相近的蛋白，比如存在于淋巴、肾脏和脉络中的许多细胞含有AE2蛋白(或称为B3相关蛋白，B3RP)、对于神经元特异性的AE3蛋白。AE2和AE3蛋白在结构上与band3非常相似，它们的氨基酸数目略大于band3蛋白，约1200个氨基酸残基，其主要的不同就是多了N末端区域的300个残基。(Reithmeier R.A.F.，1993)。

阴离子交换家族的蛋白是氨基端存在很大的分歧，但是羧基端膜区域却是高度保守的(Koptto RR，1990)。比如鲑鱼band3的细胞质区域与鼠band3仅有33％的相同性，而在跨膜区域却存在62％的相同性(Hubner S，Michel F et al.，1992)。跨膜区域高度的蛋白相同性表明阴离子交换家族的所有蛋白是结构相似的，并且具有相似的阴离子交换功能和机制。

根据氨基酸同源比较的结果，本发明的多肽与上述的阴离子交换蛋白band3活性区域相似，并且包含阴离子交换蛋白家族特征性的保守序列，因此认为此蛋白是一种新的阴离子交换蛋白，具有该家族蛋白的生物学功能，并命名为人阴离子交换蛋白10.01。

由于如上所述人阴离子交换蛋白10.01蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人阴离子交换蛋白10.01蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人阴离子交换蛋白10.01蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人阴离子交换蛋白10.01以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人阴离子交换蛋白10.01的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人阴离子交换蛋白10.01的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人阴离子交换蛋白10.01的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人阴离子交换蛋白10.01的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人阴离子交换蛋白10.01的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人阴离子交换蛋白10.01异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。