[发明专利]一种新的多肽——人锌环指蛋白SAG蛋白27.17和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人锌环指蛋白SAG蛋白27.17，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

ROS是一组非常活跃的，短暂存在的化学物质，它在正常的呼吸过程中或是氧化损伤之后产生。ROS包括超氧化物阴离子，过氧化氢，以及有机过氧化物。低浓度的ROS在调节一些生理过程例如增殖，分化，细胞凋亡以及老化中起作用。高浓度的ROS对细胞是剧毒的，会诱导DNA损伤，过氧化脂质，以及降解蛋白质。ROS主要在细胞凋亡的启动/激活步骤中起作用，因为多数细胞凋亡诱导剂都产生ROS，例如放射，UV，化学试剂，神经酰胺以及生长因子(病理性)退隐等。ROS是通过修饰直接参与细胞凋亡的细胞氧化还原敏感分子，例如p53以及NF-B而间接起作用的。金属螯合剂以及金属离子是氧化还原敏感试剂，能够通过Fenton反应介导ROS生成。1，10-二氮杂菲(OP)是一种典型的金属螯合剂，能够通过增加细胞表面APO/Fas配体的表达诱导细胞凋亡，通过螯合锌或通过提升其氧化还原活性诱导核小体间DNA断裂(Abello，P.A.，S.A.Fidler，G.B.Bulkley，and T.G.Buchman.1994.Ant ioxidants modulate induction ofprogrammed endothelial cell death(apoptosis)by endotoxin.Arch.Surg.129：134-141[Medline])。

SAG(对细胞凋亡敏感基因)可作为一种可诱导基因由氧化还原敏感的复合物兼细胞凋亡诱导物1，10-二氮杂菲(OP)克隆。SAG编码一种新的锌环指蛋白，在生物的进化中高度保守。锌环指蛋白基因家族成员包括C3HC4或C3H2C3(一个半胱氨酸到组氨酸的变化)特征序列模板，并在生化反应方面参与DNA结合，RNA结合以及蛋白与蛋白间的反应。锌环指蛋白在生物方面参与许多进程，包括肿瘤发生，信号传导，以及发育等。SAG以高水平广泛表达于人体组织中的耗能器官，例如骨骼肌，心脏以及睾丸，这些器官中的细胞运动需要高得多的氧，从而产生高水平的ROS，因而，这些细胞表达高水平的SAG以防止ROS-诱导的损伤，因而骨骼肌以及心脏中的横纹肌纤维是长时间存活的细胞，而一些遗传性肌病，包括肌营养不良以及脊柱肌萎缩就是通过细胞凋亡及坏死使肌纤维退化为特征的，因而探测SAG在这些病理细胞中的表达可用于诊断上述疾病。SAG是一种生长关键性基因，细胞的胞质及核中都存在有该基因，它被定位于人染色体3q22-24。纯化后的人SAG与锌及铜离子结合并防止脂质被铜或自由基发生器诱导而过氧化。当SAG在几种人类细胞株中过量表达时，它可保护细胞不被氧化还原制剂(金属螯合物OP以及锌或铜金属离子)诱导而细胞凋亡。从机理上来说，SAG可抑制并延缓金属离子诱导的细胞色素c释放以及caspase激活。因而，SAG是一种细胞防御性分子，作为一种抗氧化剂抑制由金属离子与活性氧种类诱导的细胞凋亡，它可作为抗氧化剂分子在许多人类肿瘤细胞株中抑制细胞凋亡。综上所述，SAG编码的蛋白能够治疗癌症，神经变形疾病，中风以及肌营养不良(HangjunDuan，1 Yuli Wang，Molecular and Cellular Biology，April 1999，p.3145-3155，Vol.19，No.4)。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人锌环指蛋白SAG蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人锌环指蛋白SAG蛋白27.17。

由于如上所述人锌环指蛋白SAG蛋白27.17蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人锌环指蛋白SAG蛋白27.17蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人锌环指蛋白SAG蛋白27.17蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。