[发明专利]风疹、巨细胞、单疱病毒及弓形虫抗体酶免联检试剂盒

说明书

本发明属于生物技术领域。

酶免检测方法以其快速、简便和灵敏度高等特性，已在全世界范围内的诊断检测中得到日益广泛的应用，并且逐步取代固相放射免疫分析方法。

弓形虫(Toxoplasma)，风疹病毒(Rubella virus)，巨细胞病毒(Cytomegalovirus)，单纯疱疹病毒I型、II型(Herpes simplex virus I、II)，缩写为ToRCH，《全国临床检验操作规程》(第二版)已有规定，以下即运用此缩写。

现有技术检测ToRCH感染的酶免试剂都是一次检测只能测一个指标，这样在实际检测中不仅浪费试剂，效率也不能提高，使用起来不方便，其它方法也有此弊病。

本发明涉及了临床医学诊断ToRCH早期感染的过程中，通过单次实验，即可全部筛除ToRCH·IgM阴性标本，使ToRCH·IgM抗体的联合检测得以实现的一种酶免诊断试剂盒，主要解决诊断ToRCH早期感染过程中，通常需要对一份标本逐一检测单项抗体，既费时又费力，又增加试剂成本的问题。

本发明的特征是在一般酶免诊断试剂的生产条件下，完成ToRCH·IgM抗体酶免联检试剂盒的组配，采用酶免捕获法，试剂盒组成为抗人IgM抗体包被板，ToRCH多项组合抗原，多项组合酶标记物，底物液A(TMB)，底物液B(H₂O₂)，反应终止液(H₂SO₄)，洗涤液(PBST)，阴、阳性对照血清，通过对二到五种特异性抗原及相应的二到五种特异性酶标抗体，按适当比例及浓度进行组配，使得单项ToRCH指标均为阴性的标本，联检结果仍为阴性，单项指标如有阳性的标本联检结果则为阳性；这样临床标本中占90％比例的阴性标本即可确定为阴性，10％左右比例的阳性标本再用单项酶免试剂盒进行逐一检定，以确定具体阳性指标。

本发明涉及ToRCH五项联检试剂盒、四项联检试剂盒、三项联检试剂盒、二项联检试剂盒，均能一次区分阴性或阳性IgM抗体。

以下结合实施例说明本发明。

以刚地弓形虫(Toxo)、风疹病毒(RV)、巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒I型、II型(HSV-I)、(HSV-II)五项IgM抗体联检试剂盒为例。

本试剂盒采用酶免捕获法，本试剂是通过以下技术方案来实现的：

1、用最适浓度的抗人IgM抗体(μ链)包被反应板微孔并加以洗涤、封板。

2、组配ToRCH组合抗原，通过滴定确定组配的最佳比例和浓度。(普通的单项酶免试剂为单项抗原，联检试剂中我们使用了ToRCH的二到五项联检抗原，实施例为五项联检，因此此处的组合抗原为Toxo、RV、CMV、HSV-I、HSV-II五项组合抗原。)

3、配制Toxo、RV、CMV、HSV-I、HSV-II五项联检所需酶标记物溶液，所用各项抗体均需达到一定的纯度，用辣根过氧化物酶(HRP)进行标记，通过滴定反应，确定最终酶标记物溶液的浓度。

4、底物溶液的配制，选用四甲基联苯胺(TMB)为底物液A，过氧化氢(H₂O₂)为底物液B。

5、阴性血清制备，采用正常人血清，多份混合并进行防腐处理。

6、阳性血清的制备，采用ToRCH·IgM抗体检测阳性的血清，多份混合并进行灭活及防腐处理后采用。

7、洗涤液及终止液选用常规ELISA法所要求的通用方法配制，洗涤液为PBST，终止液为2MH₂SO₄。

8、该组成的试剂盒按照ELISA方法进行操作检测，10例临床标本结果列举如下表：

P/N＞5试剂有效，N值＜0.05时，以N为0.05计，

样本OD值＞2.1N，判为阳性。

其中，联检结果3号、9号为阳性，其余均为阴性；

单项试剂盒结果为：

3号：CMV·IgM阳性

9号：Toxo·IgM、RV·IgM阳性

本发明可简单方便地应用于临床医学诊断，尤其是大大降低了检测工作量和试剂成本，为大规模操作提供更为简便有效的方法。