[发明专利]以具有催化活性的核酸为基础的诊断方法

权利要求书

1、测定受试者是否患有其特征在于存在已知核酸突变的疾病的方法，它包括步骤：

(a)从受试者分离核酸分子样品；

(b)(i)扩增在分离的样品中存在的核酸片段，该片段已知含有在患有该疾病的受试者中存在的突变，和(ii)在合适的条件下，将所得的扩增片段与催化性核酸分子接触，其中该催化性核酸分子特异性地识别并裂解(1)在具有已知突变的核酸片段中或(2)在相应的野生型核酸片段中，但不是同时在两者中存在的靶序列，前提是步骤(ii)可在步骤(i)之后或同时进行；和

(c)测定步骤(b)(ii)中的催化性核酸分子是否裂解扩增的片段，以确定受试者是否患有该疾病。

2、测定受试者是否患有其特征在于存在多种已知核酸突变的疾病的方法，它包括步骤：

(a)从受试者分离核酸分子样品；

(b)(i)扩增在分离的样品中存在的核酸片段，该片段已知含有在患有该疾病的受试者中存在的多种突变，和(ii)在合适的条件下，将所得的扩增片段与多种催化性核酸分子接触，其中各催化性核酸分子特异性地识别并裂解(1)在具有已知突变的核酸片段中或(2)在相应的野生型核酸片段中，但不是同时在两者中存在的靶序列，前提是步骤(ii)可在步骤(i)之后或同时进行；和

(c)测定步骤(b)(ii)中的各催化性核酸分子是否裂解扩增的片段，以确定受试者是否患有该疾病。

3、测定受试者是否患有其特征在于存在多种已知核酸突变的疾病的方法，它包括步骤：

(a)从受试者分离核酸分子样品；

(b)(i)扩增在分离的样品中存在的核酸片段，这些片段已知共同含有在患有该疾病的受试者中存在的多种突变，和(ii)在合适的条件下，将所得的扩增片段与多种催化性核酸分子接触，其中各催化性核酸分子特异性地识别并裂解(1)在具有一种已知突变的一种核酸片段中或(2)在相应的野生型核酸片段中，但不是同时在两者中存在的靶序列，前提是步骤(ii)可在步骤(i)之后或同时进行；和

(c)测定步骤(b)(ii)中的各催化性核酸分子是否裂解含有其各自靶序列的扩增片段，以确定受试者是否患有该疾病。

4、权利要求1，2或3的方法，其中受试者是人类。

5、权利要求1，2或3的方法，其中疾病选自癌症，AIDS和囊性纤维化。

6、权利要求5的方法，其中该疾病是癌症。

7、权利要求1，2或3的方法，其中扩增的核酸片段是RNA，且催化性核酸分子选自DNA和RNA。

8、权利要求1，2或3的方法，其中扩增的核酸片段是DNA，催化性核酸分子是RNA或DNA。

9、权利要求1，2或3的方法，其中(a)使用聚合酶链反应进行扩增；(b)催化性核酸分子是10-23DNAzyme；和(c)聚合酶链反应采用适于起动该片段扩增的DNA引物，该引物含有至少一个嘌呤核糖核苷酸残基，它用作被10-23DNAzyme识别和裂解的扩增片段内的5′侧位点。

10、权利要求9的方法，其中扩增片段被DNAzyme反式识别和裂解。

11、权利要求9的方法，其中(a)聚合物链反应采用一种适于起动该片段扩增的第二DNA引物，该第二引物包含编码10-23 DNAzyme的酶基因，以便扩增时，所得的扩增的核酸分子包含10-23 DNAzyme；和(b)扩增的核酸片段被DNAzyme顺式识别和裂解。

12、用于实施权利要求1，2或3的方法的试剂盒，包含(a)一种催化性核酸分子，它特异性地识别和裂解(i)在具有已知是一种疾病的特征的突变的核酸片段中或(ii)在相应的野生型核酸片段中，但不是同时在两者中存在的靶序列，和(b)一种核酸试剂，它适用于扩增含有靶序列的核酸片段。

13、用于实施权利要求9的方法的试剂盒，包含(a)10-23 DNAzyme，它特异性地识别和裂解(i)在具有已知是一种疾病特征的突变的核酸片段中或(ii)在相应的野生型核酸片段中，但不是同时在两者中存在的靶序列，和(b)适于在聚合酶链式反应条件下起动该片段扩增的DNA引物，该引物含有至少一个嘌呤核糖核苷酸残基，它用作被10-23 DNAzyme识别和裂解的扩增片段内的5′侧位点。

14、用于实施权利要求11的方法的试剂盒，包括：

(a)第一DNA引物，它包含编码10-23 DNAzyme的酶基因，该10-23DNAzyme特异性地识别和裂解(i)在已知是一种疾病特征的突变的核酸片段中或(ii)在相应的野生型核酸片段中，但不是同时在两者中存在的靶序列，该第一引物适于在聚合酶链式反应条件下起动该片段的扩增；和

(b)一种第二DNA引物，它适于在聚合酶链式反应条件下起动该片段的扩增，该第二引物含有至少一个嘌呤核糖核苷酸残基，它用作被10-23 DNAzyme识别和裂解的扩增片段内的5′侧位点，

以便在扩增时，(i)所得的扩增的核酸分子包含10-23 DNAzyme，和(ii)扩增的核酸片段被DNAzyme顺式识别和裂解。