[发明专利]用于测定LogP值的高效率HPLC方法

说明书

本发明总的来说涉及化合物库的Log P值的测定，例如，组合和/或引导产生(Lead generation)库。

对于许多药物和杀虫剂来说，在它们的生理活性和疏水性之间存在一定关系。用于测定疏水性的经典方法为测定化合物在水和正辛醇的分配对数。当在色谱保留数据和正辛醇/水分配系数的对数(Log P)之间可以建立关系时，化合物的疏水性可以通过色谱测定，而不是通过振摇烧瓶的方法。正辛醇/水分配系统不一定是理想的方法。基于HPLC方法的可靠性，源于色谱的测定可能更可靠。

应用色谱方法同振摇烧瓶方法相比具有许多优越性。例如，色谱方法更快，并更适合含有杂质的化合物。因不需要定量测定，该方法可以应用于易挥发的化合物。

已经开发了多种用于测定Log P值的HPLC方法。与应用HPLC方法相关的一个限制是当评价电离的化合物时，必须要特别小心。通常，Log P值的的计算需要对化合物解离因子的校正(CD)。

一个应用HPLC测定Log P值的方法涉及涂布具有水饱和正辛醇的硅烷化硅藻土载体，并应用正辛醇饱和缓冲液作为洗脱剂(Mirrlees等，医学化学杂质(J.Med.Chem.)，19：615(1976))通过改变柱长和流速，可以获得范围在-0.3和3.7之间的Log P值。在C18柱中，还确定了LogP值与保留体积的对数值之间的相关性。已知Log P值与HPLC之间相关的多种其它方法，每个方法都有一定的优点和缺点(化学分析，91：234-278(11章)，Wiley和Sons，纽约(1987))。

从HPLC测定(log k’)获得的保留参数可以用于获得有关化合物疏水性的信息。用疏水固定相和用水作为流动相的保留数据可以直接应用，尽管它通常导致过长的保留时间。在某个洗脱组分下测得的等分数据(对于给定的洗脱组分X，典型为log k’_x)，可以用于计算Log P值。当应用含有可与水混合的有机溶剂(如甲醇、乙腈和丙酮)的水溶液，色谱数据可以外推至流动相中有机溶剂为0％的点，其可以使HPLC比单独使用水时流速快，仍可以获得合理可靠的结果。

但是，该方法有一定限制，因为只有少量可与水混溶的有机溶剂可存在于水中。如果有机溶剂存在量过多，浓度与log k’_w之间的线性关系可能就不存在。几个发明者已致力于应用等分log k’_x值，而不是log k’_w值。

用于测定Log P值的HPLC方法的进一步限制在于他们通常依赖于容量因子与Log P值之间的相关性，该相关性通常只是对相关化合物接近，对含有不同官能团的化合物较差。

尽管具有与应用过多有机溶剂相关的限制和与在反相柱上分析高极性电离化合物相关的问题，基于Log P值与log k’之间的线性关系，HPLC方法仍可以用于测定大量有机化合物。不论如何，提供能克服这些方法限制的其它HPLC方法，都是有利的。并且，提供用于测定化合物库中疏水性的方法是很有利的。本发明提供了这类方法。

本发明公开了用于高效率化合物库的Log P值测定的方法和装置，例如，组合和/或引导产生库。该方法涉及获得多种要评价的化合物，应用HPLC方法测定化合物的Log P值。在一个优选的实施方案中，同时测定化合物的纯度和Log P值。在另一个优选的实施方案中，对化合物进行Log P值测定和用于检测其生物活性的生物检测。对具有所需生物活性和Log P值的化合物可以进行进一步检测，与具有所需Log P值、但活性不理想的化合物和具有所需活性、但Log P值不理想的化合物分别进行评价。

该方法的优点在于它可以进行不仅具有所需的生物活性、而且具有预定应用所需的疏水性/亲水性的化合物的迅速测定。可以筛选组合库中大量的化合物，迅速鉴别用于特定目的的化合物。

在另一个优选的实施方案中，该方法允许基于保留时间计算Log P值的测定，而不是等分方法(其不使用梯度)。

图1为一系列标准物Log P值对保留时间的绘图。

图2为一系列标准物Log P值对容量因子的绘图。

图3为一系列标准物Log P值对Log K的绘图。

本发明公开了用于化合物库中测定Log P值以及任选的纯度的方法和装置。该方法可以广泛应用于组合库和引导产生库，其可以任选进行鉴别和/或效果的评价，例如，应用于生物检测。