[发明专利]一种新的多肽——花生四烯酸环氧酶42.46和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——花生四烯酸环氧酶42.46，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

P450在NADPH依赖性的花生四烯酸环氧化中具重要作用。P450花生四烯酸环氧酶是一种对人类心脏中的内源性花生四烯酸起环氧化作用的酶，它催化的反应具异构选择性，它属于CYP2基因家族，在肝脏、肾脏、肺及垂体等组织中均有活性。它催化的产物为EET，该催化反应需P450的介导，EET在调节膜的离子流量、促进肽激素释放及在血管平滑肌收缩等方面具重要功能，说明环氧化作用有重要的生理功能。存在于肝脏、肾脏、肺及血浆中的EET具手性，说明P450在花生四烯酸的生物激活方面有重要作用。P450起源的花生四烯酸的代谢产物和高血压的病理生理相关，EET还对心脏血管具有一定功效，如：它会导致肾脏动脉血管收缩，肠及冠状动脉舒张，从而抑制血小板集合，此外它还会加剧心脏局部缺血。

1996年Moomaw CR等人克隆出一0.9kb长、与鼠CYP2J1同源的SW2-14的cDNA，它是CYP2基因家族的新成员，其长度为1876kb，在6号到1511号核苷酸之间有一个开放阅读框，以ATG为起始密码子，TAA为终止密码子，并含有一5′端的短的非编码区，以及3′端具polyA的364个核苷酸组成的非编码区，它编码512个氨基酸组成的、分子量为57653Dal的蛋白质，该蛋白有一个血红素结合区(FSIGKRACLGEOLA)，其448位是不变的Cys，它被称为人CYP2J2。该蛋白在心脏中高度表达，而在肝脏、肠、肾脏中含量低，而大脑、肺中不含有。CY2J2催化区异构及立体异构的花生四烯酸反应，它是心脏中主要的花生四烯酸环氧酶，心脏的花生四烯酸代谢除了环加氧酶、脂肪氧合酶催化外，P450单氧酶也是主要酶之一。P450单氧酶在药物、致癌物等外源性复合物的代谢中具重要功能，它也能被内源性的底物如类固醇、脂肪酸等激活。P450单氧酶、P450花生四烯酸环氧酶等酶体系可能在脊椎动物心脏的生理、病理中有重要作用。[J.Biol.C.，1996，271(7)，3460-3468]

本发明的新的多肽与已知的人细胞色素P450花生四烯酸环氧酶组成成分在蛋白水平上具45％的同源性和63％的相似性，并与之具有相似的结构特征，由此认为其是一种新的人细胞色素P450花生四烯酸环氧酶组成成分，命名为多肽命名，并与已知蛋白具有相似的生物学功能，它与高血压、平滑肌收缩、冠状动脉舒张等密切相关，可能在维持心脏动态平衡方面也有作用，改变其浓度会引起心脏功能紊乱。此外，它在上述相关疾病的诊断、治疗中亦有一定作用。

由于如上所述花生四烯酸环氧酶42.46蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的花生四烯酸环氧酶42.46蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新花生四烯酸环氧酶42.46蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——花生四烯酸环氧酶42.46以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码花生四烯酸环氧酶42.46的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码花生四烯酸环氧酶42.46的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产花生四烯酸环氧酶42.46的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——花生四烯酸环氧酶42.46的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——花生四烯酸环氧酶42.46的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与花生四烯酸环氧酶42.46异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；