[发明专利]黄芪甲苷在制备药物组合物中的应用

说明书

本发明涉及中药黄芪提取物黄芪甲苷的药物用途，具体涉及黄芪甲苷在制备治疗病毒性心肌炎药物中的应用。

病毒性心肌炎是临床常见心脏疾病，常危及病人生命安全，需及早发现、早日治疗。中药黄芪作为常用治疗药，其全药应用于临床治疗，已取得较好效果，但目前治疗用黄芪注射液，因外界各种因素影响，其质量不易控制，易产生沉淀，而影响治疗效果，寻找一种质量稳定、价格适宜、治疗效果好的中药治疗剂，一直是临床医生和药师的愿望。

黄芪甲苷(astragaloside IV)是自中药黄芪中提取、分离的单体化合物，其化合结构式如下：分子式C₄₁H₆₈O₁₄晶型无色针状结晶熔点309-310℃溶解度甲醇稍溶，乙酸乙酯、丙酮及水几乎不溶，乙醇加热溶解，冷后析出。红外光谱(KBr)cm^-1 3510，3388，2950，2870，1650，1458，1380，1367，1070，1047，1020，895

本发明的目的是提供黄芪甲苷单体化合物作为药物制剂的原料。

本发明的另一目的是提供黄芪甲苷的新用途，即在制备防治病毒性疾病药物制剂的用途。涉及黄芪甲苷作为制备预防和治疗柯萨奇病毒性心肌炎药物组合物的应用。

本发明通过下述方法和步骤制备黄芪甲苷：

(1)制备黄芪浓缩液

取黄芪药材，去除杂质后，切片，加10倍量的水，浸泡30分钟后煎煮1．5小时，过滤，保留第一次煎煮液，药渣再加8倍量的水煎煮1小时，过滤，保留第二次煎煮液，药渣再加8倍量的水煎煮1小时，过滤，保留第三次煎煮液，然后合并三次煎煮液，常压浓缩至每毫升相当于含2克黄芪生药的浓缩液。

(2)制备黄芪精制液

将上述黄芪浓缩液加入乙醇至含醇量为70％，搅拌后于2-10℃条件下放置48-72小时，过滤，去除沉淀，滤液回收乙醇并浓缩至每毫升相当于含2克黄芪生药的浓缩液，再加入乙醇至含醇量为80％，搅拌后于2-10℃条件下放置48-72小时，过滤，去除沉淀，滤液回收乙醇并浓缩至稠浸膏，加稠浸膏量的6-7倍的蒸溜水，搅拌均匀，于2-10℃条件下放置12小时，滤除沉淀，滤液加适量活性碳煮沸30分钟，冷至室温，于2-10℃条件下放置12小时，滤除活性碳和沉淀，滤液用NAOH调PH为7．5，制得黄芪精制液。

(3)分离黄芪甲苷

将上述黄芪精制液，用等量正丁醇提取3次，合并3次提取液得正丁醇提取液，回收溶媒，制得黄芪正丁醇浸膏。

将上述正丁醇浸膏，用少量甲醇溶解，加入层析用硅胶，搅匀，水浴上挥干甲醇，制得呈流动状的黄芪正丁醇浸膏与硅胶的混合物。

将其加入到硅胶柱顶部，以硅胶簿层层析检视，用氯仿／甲醇梯度洗脱，簿层层析检视，合并有黄芪甲苷的部分，回收溶媒，析出白色固体物。将白色固体物用甲醇重结晶，放置，析出无色针状结晶黄芪甲苷。

本发明黄芪甲苷可作为药物原料制成片剂、注射剂、缓释剂、胶囊以及复方制剂。

本发明黄芪甲苷经动物实验，结果证实对小鼠柯萨奇B₃病毒性心肌炎有治疗作用，能减少心肌炎面积，减轻VMC小鼠心肌炎坏死程度改善心功能。对CVB₃感染的心肌细胞具有良好的保护作用。有抗柯萨奇病毒作用。

本发明的动物实验方法与结果如下：

一、黄芪甲苷治疗小鼠柯萨奇B₃病毒性心肌炎的实验研究及其对颗粒酶B表达的影响

(一)药物来源及给药途径

黄芪甲苷，由中山医院药剂科分离提纯，为无色针状结晶，不溶于水，将黄芪甲苷加入到5％羧甲基纤维素钠(CMC)水溶液中，浓度分别为1mg／ml、2mg／ml、4mg／ml，黄芪注射液(上海福达制药有限公司提供，每支4g／2ml)，自小鼠腹腔注射病毒日起，灌胃给药，每日1次，每次0．1ml，正常及病毒对照组小鼠灌胃给0．1ml的5％羧甲基纤维素钠水溶液。

(二)实验动物及分组

清洁级4周龄BALB／c雄性小鼠120只，分为正常对照组、正常+黄芪组，正常+黄芪甲苷组；病毒对照组，病毒+黄芪(黄芪注射液0．2g)组，病毒+黄芪甲苷0．1mg、0．2mg、0．4mg组。

(三)观察药物毒性作用