[发明专利]一种新的多肽——与VIII因子基因的CpG岛结合的基因产物8.69和编码这种多肽的多核苷

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——与VIII因子基因的CpG岛结合的基因产物8.69，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

人类许多疾病与X染色体长臂28区域(Xq28)调聚末端有关，如肌小管肌病，生殖系统发育异常，血友病等。血友病是一种由于缺乏VIII因子而导致的凝血异常，人成熟的VIII因子基因在几乎所有组织中表达，其转录的mRNA约为1.8kb，编码由2351个氨基酸组成的蛋白质，其氨基酸序列的A和C结构域高度保守，而B及另两个结构域保守性不高。Xq28中的CpG岛共有22个，CpG岛能启动功能上不相关的两个基因的转录。[Elder B Genomics 1993 May；16(2)：374-9]

1992年Kenwrick.S等人克隆出的Xq28的新基因——c6.1A和c6.1B，这两个基因是从位于VIII因子上游70kb处的CpG岛逆转录而来。c6.1A基因在物种间高度保守，且在人类各组织中的表达水平均高，而c6.1B基因则保守性较低，且仅在少数一些组织中表达。Xq28的c6.1A基因和B细胞中非转录活性的常染色体有一定的同源性，c6.1B与已发现的其它基因没有显著的同源性。c6.1A具一个由293个氨基酸组成的开放阅读框(ORF)，而c6.1B则无。邻近于VIII因子基因的表达序列是Xq28在该区域发生疾病的主要位置，但这两个基因均与疾病的发展无关。Xq28的c6.1A和c6.1B基因区域对于生理及心理的发育有至关重要的作用。[Hum Mol Genet 1992 Jun；1(3)：179-86]

Xq28染色体上具有许多与人类疾病相关的基因，1992年发现的两个基因也是如此，因而该染色体与人类的健康紧密相关。c6.1A和c6.1B的表达产物在生物体内对于维持正常生命活动有重要作用，若异常会引起血友病A，精神障碍，发育异常等疾病。此外，这两个基因在上述疾病的诊断、治疗等方面亦有一定作用。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与与VIII因子基因的CpG岛结合的基因产物的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为与VIII因子基因的CpG岛结合的基因产物8.69。

由于如上所述与VIII因子基因的CpG岛结合的基因产物8.69蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的与VIII因子基因的CpG岛结合的基因产物8.69蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新与VIII因子基因的CpG岛结合的基因产物8.69蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——与VIII因子基因的CpG岛结合的基因产物8.69以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码与VIII因子基因的CpG岛结合的基因产物8.69的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码与VIII因子基因的CpG岛结合的基因产物8.69的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产与VIII因子基因的CpG岛结合的基因产物8.69的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——与VIII因子基因的CpG岛结合的基因产物8.69的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——与VIII因子基因的CpG岛结合的基因产物8.69的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与与VIII因子基因的CpG岛结合的基因产物8.69异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。