[发明专利]一种新的多肽——紧密连接蛋白ZO－1－10.01和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——紧密连接蛋白ZO-1-10.01，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

细胞连接是多细胞有机体中相邻细胞之间通过细胞质膜相互连接、协同作用的重要组织方式。根据形式功能的不同分为三大类：封闭连接(occludingjunctions)、锚定连接(anchoring junctions)、通讯连接(communicatingjunctions)。紧密连接(tight junctions)是封闭连接的典型代表，将相邻细胞的质膜密切地连接在一起，阻止溶液中的分子沿细胞间隙渗入体内。紧密连接可阻止可溶性物质从上皮细胞层的一侧扩散到另外一侧，因此起着重要的封闭作用，同时还将上皮细胞的游离端与基底面细胞质膜上的膜蛋白相互隔离，以行使其各自不同的膜功能，因此紧密连接除了封闭作用外，还具有隔离和一定的支持功能。紧密连接、小带闭合(ZO)形成调节上皮细胞和内皮细胞的细胞间屏障。

ZO-1是最早发现的一种紧密连接蛋白，是一种外围膜磷脂蛋白，在上皮细胞和内皮细胞紧密连接中都发现有表达(Stevenson，B.R.，Sillciano，J.D.etal.，1986；Balda，M.S.，and Anderson，J.M.，1993)。亚显微结构显示，ZO-1严格地位于细胞质膜表面细胞-细胞相接触位点上(Stevenson，B.R.，Sillciano，J.D.et al.，1986)。ZO-1也位于肾小球的上皮细胞高度修饰的紧密连接位点(Schnabel，E.Anderson，J.M.et al.，1990)以及一些培养的非上皮细胞的细胞-细胞相接触位点，包括脑中的星形细胞(Howarth，A.G.，Hughes，M.R.et al.，1992)。

人类的ZO-1蛋白含有1736个氨基酸残基，约94.7KDa，具有高的Pro含量(9.7％)，这是导致其不规则电泳迁移的因素。ZO-1属于一个在质膜和特异性细胞间连接中涉及信号转导的蛋白家族。ZO-1与dlg、PSD-95和p55相似，也包含了一个与酵母GK相同源的区域，GK能够催化以下过程：5’-GMP＋ATPGDP＋ADP(Berger，A.，Schiltz，E.，and Schulz，G.E.，1989)。ZO-1蛋白同时含有SH3和GK区域，因此在信号转导过程中参与了小GTP结合蛋白耦联旁路。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与紧密连接蛋白ZO-1的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为紧密连接蛋白ZO-1-10.01。

由于如上所述紧密连接蛋白ZO-1-10.01蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的紧密连接蛋白ZO-1-10.01蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新紧密连接蛋白ZO-1-10.01蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——紧密连接蛋白ZO-1-10.01以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码紧密连接蛋白ZO-1-10.01的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码紧密连接蛋白ZO-1-10.01的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产紧密连接蛋白ZO-1-10.01的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——紧密连接蛋白ZO-1-10.01的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——紧密连接蛋白ZO-1-10.01的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与紧密连接蛋白ZO-1-10.01异常相关的疾病的方法。