[发明专利]一种昆虫病原线虫的贮存方法

说明书

本发明涉及大批量贮存和运输作为生物杀虫剂的昆虫病原线虫的方法。

昆虫病原斯氏科Steinernematidae与异小杆科Heterorhabditidae线虫是新型生物杀虫剂。这类线虫是以感染期虫态(infective juveniles，IJ)随寄主食物或从昆虫的自然开口(如肛门、气孔)、节间膜进入昆虫体内，随后释放肠腔中携带的Xenorhabdus属(目前与斯氏科线虫共生)或Photorhabdus属(目前与异小杆科线虫共生)的共生细菌。线虫以及共生细菌分泌的毒素(毒性因子)导致昆虫死亡。昆虫病原线虫具有广泛的寄主范围；对寄主具主动搜寻能力，特别是对土栖性及钻蛀性害虫；对人畜、环境安全。近年来，已广泛应用于防治农、林、牧草及卫生等害虫，受到国内外学者及商业部门的高度重视，并走向商品化。

昆虫病原线虫的感染期幼虫是能侵染昆虫寄主的虫龄。该龄期的线虫不取食，依靠体内贮存的能量物质。但他们需要氧气和一定的湿度条件才能存活较长时间。影响昆虫病原线虫作为生物农药使用的主要限制因素是感染期线虫的贮存和运输能力。在昆虫病原线虫制剂商品化过程中，延长线虫的有效货架时间，以便于长距离运输和田间应用的最佳时间选择，是线虫产业化生产的关键技术之一。线虫贮存的基本原理是在一定环境条件下，使线虫代谢降低，体内消耗减少到能维持其生命最低水平而对环境压力具有一定的忍耐能力；需要时，在一定条件下又可将其生命活动恢复到正常水平。

目前，贮存线虫的方法有两类：一为在一定湿度下慢速脱水，使线虫进入干燥状态的保存方法(Int.Patent，WO/87/78515)；另为利用吸附性填充物质如海绵、硅藻土、活性炭，以及高分子凝胶等，吸附保存线虫。目前，世界上大多数的专利描述的线虫贮存方法是将感染期线虫加入各种填充物中。例如，Yukawa et al.(U.S.Patent4,765,275)描述一种线虫贮存和运输的方法，将线虫与吸附性物质(如活性炭)混合，且加入抑菌物质。Pruitt & Friedman(U.S.Patent5,170,744)将线虫贮存于凝胶填充物中，同时加入蔗糖、葡萄糖作为稳定剂。Nelsen & Mannion(U.S.Patent4,615,883；4,753,799)将凝胶制成线虫胶囊。Bedding(U.S.Patent5,042,427)利用各种吸附性泥土贮存线虫。De Vlieger & Smits(U.S.Patent5,807,566)将可分解的聚合物(如蛋白质、脂多糖等)和可吸收紫外光的物质与线虫混合，进行剂型配制。Silver et al.(Int.Patent，WO95/05077)以各种粉状物质(如硅胶、泥土、纤维素、淀粉等)加上防霉剂、抑菌剂、乳化剂、稳定剂、紫外光吸收剂来制作线虫胶囊。Chang & Gehret(U.S.Patent 5,401,506)也以各种脂多糖类物质、植物油、昆虫饵料和过氧化氢(0.01-1.0％重量计)贮存线虫。尽管线虫可贮存于各种填充物中，但必须保持一定的湿度和氧气。线虫一般贮存于比较密闭的包装中，以利于保持湿度。但是，密闭的包装环境影响了线虫贮存过程中代谢气体(如二氧化碳、含氨化合物等)的散放和氧气的供应。此外，在线虫的运输过程中，特别是线虫的液体低温运输时，排除贮存物中的代谢物质和增加氧气的含量，对线虫的存活很重要。

本发明的目的是提供一种能用于长时间贮存和贮运昆虫病原线虫的方法。

本发明所提供的长时间贮存和贮运昆虫病原线虫的方法，其技术方案包括：在清洗干净的昆虫病原线虫中加入填充物质，如水、硅藻土、高岭土、各种凝胶、纤维素或海绵等，制成线虫液剂、颗粒剂或可湿性粉剂，然后贮存于有氧、缺氧或无氧的环境中。其特点是在于在昆虫病原线虫的贮存环境中放置二氧化碳吸附剂或(和)二氧化碳吸附剂兼增氧剂，所说的二氧化碳吸附剂或(和)二氧化碳吸附剂兼增氧剂独立包装，留通气口，置于线虫贮存物中。

本发明所述的二氧化碳吸附剂可为氢氧化物，如氢氧化钙、氢氧化钠、氢氧化镁、氢氧化钾等物质中的任一种或其若干种的混合物。这些氢氧化物可吸附二氧化碳，生成碳酸盐和水。因此，可降低线虫剂型中的二氧化碳浓度，保持良好的线虫贮存环境。

本发明所述的二氧化碳吸附剂兼增氧剂可采用碱土金属的过氧化物，如过氧化钙、过氧化钠、过氧化钾、过氧化镁等物质中的任一种或其若干种的混合物。这些碱土金属的过氧化物可吸收线虫贮存环境中的水分，生成氢氧化物，放出氧气。所生成的氢氧化物又可吸附二氧化碳，可降低线虫剂型中的二氧化碳浓度。