[发明专利]一种新的多肽——nucleophosmin9.68和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽—nucleophosmin9.68，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

min是一个在肿瘤细胞中表达比在正常静息细胞中要多得多的核磷酸蛋白[Feuerstein，N.，Chan，P.K.，&Mond，J.J.1988.J.Biol.Chem.263，10608-10612]。当B淋巴细胞分裂素激活刺激正常细胞生长时，伴随而来的是nucleophosmin蛋白水平的上升。Nucleophos min蛋白参与了将核糖体蛋白聚集进核糖体的过程。实验表明，nucleophosmin会在核聚集核糖体的粒状区域集中。这些蛋白形成六聚体，并且与核60S和80S前核糖体蛋白微粒(RNPs)联系在一起。当细胞予以细胞毒素(包括放线菌素D，阿霉素，丰加霉素，吕宋肽菌素和丝裂霉素)处理时，核仁发生形态和功能的改变，nucleophosmin从核仁迁移至核质[Chan，P.K.，Aldrich，M.B.，&Chakrabarty，S.1988.Cancer Lett.40，143-149]，这表明这些细胞毒素能改变或破坏nucleophosmin在核内的结合位点。Nucleopho smin磷酸化位点的氨基酸序列是S(p)EDEDEED[Chan，P.K.，Aldrich，M.B.，C

Ook，R.G.，&Busch，H.1986a.J.Biol.Chem.261，1868-1872]，该位点与其他几种磷酸蛋白，包括磷酸蛋白C23和cAMP蛋白激酶R-II亚基。该序列可能代表了普通N-II激酶的识别位点。另外，在nucleophosmin蛋白的C末端有一个富含赖氨酸特异抗原肽段结构域。

Nucleopho smin氨基酸序列中结构特征最明显的是位于蛋白中部由26个氨基酸残基(天门冬氨酸/谷氨酸)组成的酸性氨基酸片段。酸性氨基酸片段广泛出现于核蛋白，有几种蛋白甚至与nucleophosmin在该酸性片段上表现出了极大的同源性。这些片段的功能可能是限制核内蛋白以及与基本蛋白结合，例如核糖体蛋白。Nucleophosmin的磷酸化位点就位于这些酸性片段之间。在人的各种组织中有几种不同种类的nucleophosmin。Nucleopho smin由α、β、γ单体组成，其中4个α和2个β单体组成六聚体。

在小鼠的肝肿瘤中，nucleophosmin的表达比在正常肝中多50倍，并且nucleophosmin的合成在肿瘤性转化生长中起着非常重要的作用[Wai-YeeChan，Qing-Rong Liu，Jimo Borjjigin et al.，1989.Biochemistry28，1033-1039]。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与nucleophosmin的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为nucleophosmin9.68。

由于如上所述nucleophosmin9.68蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的nucleophosmin9.68蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新nucleophosmin9.68蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——nucleophosmin9.68以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码nucleophosmin9.68的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码nucleophosmin9.68的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产nucleophosmin9.68的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——nucleophosmin9.68的抗体。