[发明专利]一种新的多肽——脯氨酰寡聚肽酶13.2和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——脯氨酰寡聚肽酶13.2，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

激酶可分为若干个蛋白家族，其中包括研究最为透彻的胰凝乳蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶家族。脯氨酰寡聚肽酶及其与之相关的其它一些酶组成脯氨酰寡聚肽酶家族，也属于丝氨酸激酶，该家族涉及一些特异性的代谢过程(Barrett andRawlings，1992)。

脯氨酰寡聚肽酶首先从人类的子宫中找到，是一种能够被催产素降解的酶(Walter et al.，1971)，以单体形式存在于细胞质中。这种酶在含有Xaa-Pro-Yaa序列的多肽中能够断裂脯氨酰键，这里的Xaa是一种N末端被封闭的氨基酸，Yaa则可以是肽段、氨基酸、酰氨或者乙醇(Yoshimoto et al.，1978)。脯氨酰寡聚肽酶对于反式构象的Pro亚氨基侧多肽键是高度特异性的(Lin and Brandts，1983)。不仅存在于人类细胞中，脯氨酰寡聚肽酶在植物、微生物和哺乳动物中都能够找到，它的组织分布也较为广泛，在脑、肾、肺和肌肉中具有很高的活性。在人类体内，已经分别从肺、脑、血红细胞和胎盘中纯化得到(Kalwant andPorter，1992)。

因为PhMeSO₂F和iPr₂P-F都能够抑制其活性，脯氨酰寡聚肽酶属于丝氨酸激酶。纯化的脯氨酰寡聚肽酶的N末端是封闭的，其第136—149位置上14个氨基酸的序列为Gly-Glu-Tyr-Phe-Ala-Tyr-Gly-Leu-Ser-Ala-Ser-Gly-Ser-Asp，这段序列非常保守。

在体外，脯氨酰寡聚肽酶能够催化一些生物活性多肽(如血管紧张肽II、加压素、缓激肽等)发生裂解作用。在体内，脯氨酰寡聚肽酶能够通过参与血压紧张肽原酶系统而进行血压的调节，并且能够降低血压紧张肽II及其前体的含量。而且，由于裂解血管紧张肽而产生的多肽自体具有使血管舒张的活性(Kohara etal.，1991)。另外，脯氨酰寡聚肽酶还可能作为一种抑制剂影响记忆过程(Yoshimoto et al.，1987)。脯氨酰寡聚肽酶不能够代谢一些小的蛋白(Moryamaet al.，1988)，但其中不包括一类能够发生快速细胞外裂解的蛋白。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与脯氨酰寡聚肽酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为脯氨酰寡聚肽酶13.2。

由于如上所述脯氨酰寡聚肽酶13.2蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的脯氨酰寡聚肽酶13.2蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新脯氨酰寡聚肽酶13.2蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——脯氨酰寡聚肽酶13.2以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码脯氨酰寡聚肽酶13.2的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码脯氨酰寡聚肽酶13.2的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产脯氨酰寡聚肽酶13.2的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——脯氨酰寡聚肽酶13.2的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——脯氨酰寡聚肽酶13.2的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与脯氨酰寡聚肽酶13.2异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：