[发明专利]一种新的多肽——人磺基转移酶11.44和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人磺基转移酶11.44，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

基转移酶HNK-1ST属于磺基转移酶基因家族，是一种II型膜蛋白，它的催化亚基有两条同源序列。Lys¹²⁸，Arg¹⁸⁹，Asp¹⁹⁰，Pro¹⁹¹和Ser¹⁹⁷是该酶的保守序列。Arg¹⁸⁹，Pro¹⁹¹和Ser¹⁹⁷对于结合供体PAPS以及维持转移硫酸基到受体分子都很重要。若Lys¹²⁸和Asp¹⁹⁰分别被替换为Arg和Gly，该酶仍保留部分活性，但该酶与受体的亲和力显著下降，Lys¹²⁸和Asp¹⁹⁰包含与受体结合位中或十分接近受体结合位。Arg¹⁸⁹在结合PAPS的3′端磷酸是关键的。在3′-PB位点，Arg¹⁸⁹和Ser¹⁹⁷能直接与PAP的3′端磷酸相互作用。此两个氨基酸对HNK-1^ST活力影响大。Asp¹⁹⁰和Pro¹⁹¹的改变使二级结构中的β-折叠转变为α-螺旋，Asp¹⁹⁰能帮助稳定这一转变，因而改变PAP结合位点的核心结构，直接影响HNK-1^ST的活性，Pro191与维持酶的稳定性有关。催化亚基的5′-PBS的氨基酸包含于受体—供体的相互反映中。对于所有磺基转移酶，Lys¹²⁸在5′-PBS都是保守的，它能与PAP的5′端磷酸形成氢键，而具有催化活性。整个保守序列的3′-PB提供了一个和3′的磷酸酯的羟基结合的氢键。[Edgar Ong，the Journal of BiologicalChemistry，1997，36：25608-25612]。

1997年Edgar Ong等人克隆所得的HNK-1ST基因是HNK-1^ST家族的新成员。它的表达产物催化形成硫酸酯，它将一硫酸基团加到糖蛋白或糖脂上。它主要分布在神经系统和自然杀伤细胞的各类粘连分子中，并且在细胞之间及细胞与底物之间起重要作用。它的转录本在胎儿脑中含量高，而在胎儿肺、肾和肝中则低。它是第一个被证实可作为包含在外周无髓鞘神经中的一自主抗原，其抗原决定簇为：磺基-3G1cβ1→3Galβ1→4GlcNAcβ1→R。与GlcAT-P比较，HNK-1^ST的转录本在不同组织中的分布更广泛。HNK-1^ST在组织中作用于糖脂受体，而GlcAT-P则作用于糖蛋白。[Edgar Ong，the Journal of Biological Chemistry，1997，9：5190-5195]。

磺基转移酶对于糖脂、糖蛋白的硫酸化很重要，在生物体内控制膜上糖类的硫酸化，其表达异常可能导致膜结构异常，从而引发各种疾病。它在生物体内通常与神经系统疾病相关，并可用于诊断和治疗有关疾病。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人磺基转移酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人磺基转移酶11.44。

由于如上所述人磺基转移酶11.44蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人磺基转移酶11.44蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人磺基转移酶11.44蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人磺基转移酶11.44以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人磺基转移酶11.44的多核苷酸的重组载体。