[发明专利]一种新的多肽——人线粒体钙粘蛋白10.12和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人线粒体钙粘蛋白10.12，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

内生理活性过程中起着细胞内中介物的作用。这些生理学活性过程包括基因调控、细胞循环调控、信号转导、脑神经递质释放及肌肉收缩糖原分解等。这些作用在细胞外信号刺激钙离子释放时被激活。钙离子与多种钙结合蛋白结合，进一步通过介导一些激活其它分子的信号来发挥一些特殊的生理学功能。

细胞液中钙离子浓度的变化引起了广泛的细胞反应。细胞内的钙结合蛋白是通过酶反应或蛋白——蛋白相互作用调节来传导钙信号中的关键分子。它们中的一些在细胞周期中作用，或作用于细胞分化。被第二信号分子(如肌醇三磷酸)刺激后，它们短暂地从内质网释放到周围的细胞质中。相似的过程在核膜破裂和有丝分裂后期的染色单体分离中发生。

线粒体钙粘蛋白(calmitine)是一种在线粒体中的与钙离子相结合的蛋白。线粒体钙粘蛋白首先在人类骨骼肌cDNA库中被克隆。其cDNA长1.8kb，编码一个有390个氨基酸残基的蛋白，分子量41kDa。线粒体钙粘蛋白有21个磷酸化位点，4个十四烷基化位点和一个N糖基化位点。

线粒体钙粘蛋白与集钙蛋白(calsequestrine)相同。集钙蛋白是一种与肌浆网亲和性低，与钙离子结合能力高的蛋白。在线粒体中，这些钙离子结合蛋白的含量要比肌浆网中高得多。【Biochem Biophys Res Commun 1994 Sep30；203(3)：1477-82】

有资料表明线粒体钙粘蛋白与杜兴肌营养不良(Duchenne’s musculardystrophy，DMD)有关。在正常肌肉组织中的线粒体钙粘蛋白的含量较高，因为在正常肌肉组织中既有线粒体钙粘蛋白特异的蛋白酶，又有这种蛋白酶的抑制因子。因此可以根据肌肉的需要来调节此酶的活性。而在杜兴肌营养不良中，由于没有这种抑制因子，线粒体钙粘蛋白一经合成就被蛋白酶水解，因此线粒体钙粘蛋白的含量偏低。【Biochem Biophys Res Commun 1996 Aug 23；225(3)：701-4】

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人线粒体钙粘蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人线粒体钙粘蛋白10.12。

由于如上所述人线粒体钙粘蛋白10.12蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人线粒体钙粘蛋白10.12蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人线粒体钙粘蛋白10.12蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人线粒体钙粘蛋白10.12以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人线粒体钙粘蛋白10.12的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人线粒体钙粘蛋白10.12的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人线粒体钙粘蛋白10.12的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人线粒体钙粘蛋白10.12的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人线粒体钙粘蛋白10.12的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人线粒体钙粘蛋白10.12异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；