[发明专利]一种人硫氧化还原蛋白相关蛋白及其编码序列

说明书

本发明涉及分子生物学、酶学、生理学以及基因工程等领域。具体地，本发明涉及一种在人类肾上腺中表达的hTxRP-iso蛋白及其核酸序列。本发明还涉及该蛋白和核酸序列的制备方法和用途。

硫氧化还原蛋白(Thioredoxin，Tx)是在人类一些肿瘤里大量表达的氧化还原蛋白。Tx由癌细胞分泌，并能促进癌细胞生长。研究发现，在这过程中其氧化还原活性对于刺激癌细胞生长起了关键作用。(Chem Biol Interact 1998 Apr 24；111-112：23-34)。于是Tx被认为是一种很好的抗癌药物靶蛋白，研制能够抑制Tx氧化还原活性的药物将能有效抑制一些人类肿瘤的发生。

进一步研究发现，Tx在其行使生理作用时，还有一些相关的蛋白在起辅助作用，这些被称为硫氧化还原蛋白相关蛋白(Thioredoxin-related protein，TxRPs)。TxRPs能够影响Tx的氧化还原活性。(J Biol Chem 1998 Jul 24；273(30)：19160-6)。

本发明中，我们在人类肾上腺中克隆到人hTxRP基因(GenPept Accession No．AAC39898)的同源基因hTxRP-iso。

在本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中提及的人类hTxRP-iso蛋白序列及其核酸序列。

本发明的第一目的就是提供一种新的人基因hTxRP-iso(Genbank AccessionNo．AF????)，该基因是一个人hTxRP-iso蛋白基因。

本发明的第二目的是提供一种新的人蛋白hTxRP-iso。

本发明的第三目的是提供一种利用重组技术生产上述的新的人hTxRP-iso蛋白和核酸序列的方法。

本发明还提供了这种人hTxRP-iso蛋白多肽和编码序列的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，该分子包括：编码具有人hTxRP-iso蛋白质活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO．6中从核苷酸第102-737位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO．6中从核苷酸第102-737位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码具有SEQ ID NO．7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ ID NO．6中从核苷酸第102-737位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离出的人hTxRP-iso蛋白质多肽，它包括：具有SEQ ID NO．7氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO．7序列的多肽。

在本发明的另一方面，还提供了一种载体，它包含上述的DNA分子。

在本发明的另一方面，还提供了一种用上述载体转化的宿主细胞。在一个实例中该宿主细胞是大肠杆菌；在另一实例中，该宿主细胞是真核细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种产生具有人hTxRP-iso蛋白质活性的多肽的方法，其步骤如下：

(1)将编码具有人hTxRP-iso蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人hTxRP-iso蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO．6中从核苷酸第102-737位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)将步骤(1)中的表达载体转入宿主细胞，形成人hTxRP-iso蛋白的重组细胞；

(3)在适合表达人hTxRP-iso蛋白多肽的条件下，培养步骤(2)中的重组细胞；

(4)分离出具有人hTxRP-iso蛋白活性的多肽。

较佳地，在该方法中使用的核酸序列具有SEQ ID NO．6中第102-737位的序列。

本发明还提供了与hTxRP-iso蛋白多肽特异性结合的抗体。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。