[发明专利]一种新的多肽——人真核起始因子28和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人真核起始因子28，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

真核蛋白的起始合成是个复杂过程，需要一些起始因子的参与，并以一个三元复合物(eIF2-Met-tRNA-GTP)的形式起始。当GTP水解时，eIF2以无活性的eIF2-GDP形式从核糖体上释放。而鸟嘌呤核苷酸互变因子(eIF2B)可催化eIF2从无活性的eIF2-GDP转化为有活性的eIF2-ATP，并与Met-tRNA结合，重新形成起始的三元复合物。

eIF2B因子在调节eIF2及真核蛋白合成中起关键作用。它是个异构五聚体，由五个不同的亚基构成，分别是α、β、γ、δ、ε亚基[F.Munoz，et al JNeurochem 1998；71：1905-1911]。本发明的HeIF2Bγ是其中的一个亚基。

eIF2Bγ亚基的核苷酸序列有三个保守区域：(1)P-loop区，是磷酸结合位点，也是可能的Mg²⁺结合区。区中N-末端序列包含的特征表明eIF2Bγ亚基与结合核苷酸有关。(2)Mg²⁺结合区，与核苷酸核苷酸转移酶相关功能区有同一性。(3)I-patch区，即近C-末端的富含Ile的规律性重复区域，与结合酰基基团及五个亚基间相互作用有关。近C-末端的保守区域也可能与eIF2B和eIF2的相互作用有关。

eIF2B的活性可被一些变构因子调节，如NADP⁺，NAD⁺和ATP抑制其活性，而NADPH，NADH和多胺则激活其活性。哺乳动物的eIF2B的γ亚基与NAD(P)⁺，NAD(P)H和ATP等变构因子的结合有关。人和鼠的eIF2B的γ亚基的氨基酸序列有高度同源性，具有特征性的保守片段GVDSTGK[Nigel T.et al Biochem1996；318：631-636]。eIF2B的γ亚基可交叉连接鸟嘌呤和Met-tRNA^Met，表明γ亚基在结合配体及吡啶二核苷酸过程中均起作用。

研究发现，eIF2B的过量表达会抑制转录的起始。[Dever TE，et al.，MolCell Biol 1995；15:6351-6363]。eIF2B的结构，功能及控制活性的信号路径可用于阐明特定激素和生长因子的作用机制。eIF2B的活性在病毒感染或激素，生长因子，特定应激物等处理时，会以自身磷酸化，亚基磷酸化，变构因子或竞争性抑制等调节方式起变化。eIF2B的活性调节与胰腺中胰岛素的生成及其作用，与免疫系统的调节有密切关系。参与eIF2B调节的信号路径可能表示某些特定疾病的靶向给药途径，如糖尿病[Webb BL，et al.，Int J Biochem Cell Biol1997；29：1127-31]

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人真核起始因子的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人真核起始因子28。

由于如上所述人真核起始因子28蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人真核起始因子28蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人真核起始因子28蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人真核起始因子28以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人真核起始因子28的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人真核起始因子28的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人真核起始因子28的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人真核起始因子28的抗体。