[发明专利]一种新的多肽——人线粒体聚合酶13.86和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人线粒体聚合酶13.86，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

的半保留复制在物种的繁衍后代上起着关键的作用。有许多酶参与这个过程，如DNA聚合酶，解旋酶、拓扑异构酶等等。其中关键的是DNA聚合酶。DNA聚合酶可以将四种前体核苷酸按照碱基配对规律合成DNA链。它们都需要一条DNA单链作为模板，以及RNA或蛋白作为引物。DNA聚合酶只能以四种核苷酸5’-三磷酸为前体，反应通式为：Poly(核苷酸)_n-3’-OH+DNTP——→Poly(核苷酸)_n＋1-3’-OH＋2Pi，这种活性除了能使DNA链延伸之外，还有修复DNA和替换RNA引物的作用。

DNA聚合酶还有3’-5’外切酶的活性。这种酶活性是基于对不配对的碱基造成的单链的识别。因此这种酶活性是保证其聚合作用的正确性所不可缺少的，这种功能称为校对功能。这对于DNA作为遗传物质所必需的稳定性和极高的保真度是至关重要的。

除此以外，DNA聚合酶还有5’-3’的外切酶活性。这种活性可以使DNA双链上的缺口发生平移。

除了核中的基因组外，在线粒体中也含有一部分遗传物质。这部分物质与线粒体的结构和功能相关。核编码的DNA聚合酶γ(DNA POL γ)是复制线粒体DNA的唯一需要的酶。其基因在染色体上的位置是15q24。DNA聚合酶γ由1239个氨基酸构成，理论分子量为139.5kD。人该酶与酵母，果蝇和的人DNA聚合酶γ分别有43.0，48.7和77.6％的同源性，说明此酶在从酵母到人类的生物中是相当保守的。【Gene 1997 Jan 31；185(1)：147-52】人类的DNA聚合酶γ在骨骼肌和心肌中表达最高。这与线粒体为机体提供能量的功能是一致的。【Gene 185：147-152，1997】

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人DNA聚合酶γ的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人线粒体聚合酶13.86。由于如上所述人线粒体聚合酶13.86蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人线粒体聚合酶13.86蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人线粒体聚合酶13.86蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人线粒体聚合酶13.86以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人线粒体聚合酶13.86的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人线粒体聚合酶13.86的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人线粒体聚合酶13.86的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人线粒体聚合酶13.86的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人线粒体聚合酶13.86的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人线粒体聚合酶13.86异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。