[发明专利]一种新的多肽——层粘连蛋白B210.67和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——层粘连蛋白B210.67，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

白是基底细胞膜的主要的非胶原组分(Timpl，R.，Rohde，H.，et al.，1979；Hogan，B.L.M.，Barlow，D.P.，et al.，1984)，是各种动物的胚胎及成体组织的基膜的主要结构组分之一。层粘连蛋白是高分子糖蛋白，包含了三条不同的链：一条重链即A链以及两条轻链B1链和B2链。链与链之间通过二硫键相互结合(Cooper，A.R.，Kurkinen，M.，et al.，1981；Kurkinen，M.，Barlow，D.P.，et al.，1983)，形成一个不对称的十字型结构，即三条相似的短臂和一条非常长的臂。B1链和B2链在结构上有一定的同源性。通常细胞不直接与IV型胶原或蛋白聚糖结合，而是通过层粘连蛋白将细胞锚定于基膜上。

层粘连蛋白至少存在两个不同的受体结合部位，它具有很多生物学活性，影响到细胞之间的附着、有丝分裂的发生、细胞迁移和细胞分化等(Baron-VanEvercooren，A.，Kleinman，H.K.，et al.，1982；Timpl，R.，Johansson，S.，et al.，1983)。细胞与层粘连蛋白的结合需要一个位于细胞膜上的特异性层粘连蛋白受体的存在(Terranova，V.P.，Rao，C.N.et all.，1983；Lesot，H.，Kuhl，U.，and von der Mark，K.，1983)。

B1和B2是层粘连蛋白B2，具有相似的多区域二级结构，包括Cys富含重复区域。B2的5’非翻译区域含有259个核苷酸，接着是4,827个核苷酸的开放阅读框和TAG终止密码子，最后是3’非翻译区域。开放阅读框编码1,609个氨基酸的B2链，比B1链少了177个残基数。前端的信号肽包含33个氨基酸，以Met起始，接着的15个残基中有5个是Arg，因此带强烈的正电性，接着是14个氨基酸的疏水性区域。B2链还含有12个内部同源序列，每个序列都有约50个左右的氨基酸残基，其中有8个Cys残基，与B1链的A型重复序列相同源(Pikkarainen，T.，Eddy，R.，et al.，1987)。

B1和B2链的mRNA在不同的组织器官中表达水平是不相同的，并且在个体生长发育的不同阶段上表达水平也不尽相同(Boot-Handford，R.P.，et al.，1987)。

层粘连蛋白出现于早期胚胎中对于保持细胞间的粘连、细胞的极性及细胞的分化都有相当重要的意义。另外，层粘连蛋白还有助于神经元在体外存活，并可在缺乏神经生长因子的情况下促进中枢及各种神经元轴突的生长。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与层粘连蛋白B2的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为层粘连蛋白B210.67。

由于如上所述层粘连蛋白B210.67蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的层粘连蛋白B210.67蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新层粘连蛋白B210.67蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——层粘连蛋白B210.67以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码层粘连蛋白B210.67的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码层粘连蛋白B210.67的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产层粘连蛋白B210.67的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——层粘连蛋白B210.67的抗体。