[发明专利]一种新的多肽——脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

脂溶性维生素，在体内存在着一类依赖维生素K的蛋白，脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸(Gla)蛋白(PRGP)也是其中的一种。PRGP还可以分为PRGP1和PRGP2两种蛋白。

PRGP1和PRGP2都属于膜内在蛋白质，各含有单一的跨膜区域，并且有脯氨酸富含的细胞质区域，该脯氨酸富含区域包含了潜在的WW结合结构域PPXY(Chen，H.I.，and Sudol，M.，1995)。另外，这些脯氨酸富含区域包含了一些PXXP的序列拷贝以及一个SH3结合结构域，证明了PRGP蛋白与许多细胞骨架成员和信号分子的SH3区域以及WW区域相互作用的重要意义。

PRGP1的cDNA包含了一个165bp的5’非翻译区域(UTR)，一个657bp的编码序列和一个不多见的3.7kb的3’非翻译区域。在2O个氨基酸的前肽断裂后，剩下的成熟蛋白含有198个氨基酸残基。在核苷酸的166位置处出现起始的Met密码子，非常靠近前肽的编码序列。在核苷酸49位上还有一个框内的终止密码子，因此，不象所有其他的包含Gla区域的蛋白，PRGP1缺失一个可辨别的信号肽，成熟蛋白的跨膜区域(残基58—83)作为一个‘信号锚定器’发挥作用，直接将初生的多肽定位到内质网腔中。蛋白在膜上的定位依赖于跨膜区域氨基酸残基的相对电荷。在细胞质中的序列通常带很多的正电荷(Hartmann，E.，Rapoport，T.A.，and Lodish，H.F.，1989)，PRGP1的羧基末端带有相对多的正电荷，因此存在于细胞质中。另外，在Gla区域还有一个二硫键环，形成内质网中的氧化环境，而不是细胞质中的还原环境。

PRGP1和PRGP2在许多组织细胞中存在，但是PRGP1在脊髓中显示出最高的表达，而PRGP2在甲状腺中显示出最高的表达。

PRGP蛋白在细胞质中可能与一些含有WW区域和SH3区域的蛋白相互作用，并且，Gla区域能够与表面富含阴离子的磷脂相互作用，尤其是磷脂酰丝氨酸(Mann，K.G.，Nesheim，M.E.et al.，1990；Davie，E.W.，Fujikawa K.，andKisiel，W.，1991)。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白1的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31。

由于如上所述脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——脯氨酸富含的gamma羧基谷氨酸蛋白113.31的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。