[发明专利]一种新的多肽——蛋白酶体p40.5亚基9.79和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——蛋白酶体p40.5亚基9.79，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

白酶体是主要的蛋白水解系统的重要组成部分，能够降解细胞内的许多蛋白，包括结构上不稳定的调节蛋白以及由于突变或者外界环境发生变化导致的结构异常的一些蛋白(Coux et al.，1996；Hochstrasser，1996)。当这些或其它的细胞内蛋白以多聚泛素链的形式共价地结合到泛素上以后，就成为了26S蛋白酶体进行降解的靶子。26S蛋白酶体含有两个巨大的多蛋白混合体：20S蛋白酶体和PA700(也称为19S混合物)。26S的蛋白酶体还有两个附加的亚基：p28和p40.5，并且已经在酵母中发现了与它们同源的蛋白，分别是Nas6p和Nas7p。

P40.5的金长cDNA包含了1583个核苷酸，其中包括完整的编码区域和5’末端、3’末端的非编码区域，其3’末端的非编码区域上存在一个多聚腺苷酸信号序列：AATAAA。位于核苷序列1—3的ATG是起始密码子，被一个与翻译起始的特征序列相似的序列包围着(Kozak，1991)。P40.5基因编码的蛋白含有376个氨基酸残基，其分子量为42，945Da，蛋白等电点为5.46。而p28编码一条含有226个氨基酸残基的蛋白。

对p28和p40.5的mRNA的表达水平进行测定发现，虽然两种蛋白的mRNA在机体所有的组织中都有表达，但是各个组织中的表达水平却存在很大程度的差异，在胰腺、胎盘、睾丸、心脏和骨骼肌肉中的表达水平尤其高。在骨骼肌肉中的高水平表达类似于一些20S的蛋白酶体亚基以及其它的一些非ATP酶亚基，诸如p40(Tsurumi et al.，1995)、p97(Tsurumi et al.，1996)、p112(Yokotaet al.，1996)等。

在酵母中，对与p40.5和p28的相同源Nas7p和Nas6p进行突变实验，发现它们是非致命的，表明这两种亚基在酵母中起着并不明显的作用，可以推断它们的功能与其它的亚基相重复或者被其它的亚基所替代了。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与蛋白酶体p40.5亚基的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为蛋白酶体p40.5亚基9.79。

由于如上所述蛋白酶体p40.5亚基9.79蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的蛋白酶体p40.5亚基9.79蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新蛋白酶体p40.5亚基9.79蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——蛋白酶体p40.5亚基9.79以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码蛋白酶体p40.5亚基9.79的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码蛋白酶体p40.5亚基9.79的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产蛋白酶体p40.5亚基9.79的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——蛋白酶体p40.5亚基9.79的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——蛋白酶体p40.5亚基9.79的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与蛋白酶体p40.5亚基9.79异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；