[发明专利]一种新的多肽——人肌动蛋白相关蛋白13E－32和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人肌动蛋白相关蛋白13E-32，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

肌动蛋白是高度保守的收缩性的蛋白，它们存在于所有的真核生物细胞中(Sheterline P.，Clayton J.，Sparrow J.C.，(In)Actins，3rd Edition，Academic Press Ltd，London，(1996))。在脊椎动物中，共有三种肌动蛋白同种型：alpha，beta以及gamma(Pollard T.D.，Cooper J.A.，Annu.Rev.Biochem.55：987-1036(1986))。Alpha肌动蛋白存在于肌肉组织中并且是收缩装置的一种主要成分。Beta与gamma肌动蛋白作为细胞骨架成分以及内细胞活动性介质共存在于多数类型的细胞中。肌动蛋白以单体形式(G-肌动蛋白)或多体形式存在(F-肌动蛋白)。每一种肌动蛋白单体能与一分子的ATP结合；当聚合作用发生时，ATP水解(Pollard T.D.，Curr.Opin.Cell Biol.1：33-40(1990))。肌动蛋白是一种374到379个氨基酸残基的蛋白，其结构在进化过程中是高度保守的。近来又在不同物种中发现了一些不同的类似肌动蛋白的蛋白，例如：哺乳动物中的中心体肌动蛋白(肌动蛋白-RPV)，该蛋白是一种涉及囊泡活动性基础上的微管的多亚基中心体复合物的一种成分，这一亚家族亦被称为ARP1；ARP3亚家族包括哺乳动物中的肌动蛋白2。在肌动蛋白与肌动蛋白相关蛋白中有一段保守的特征序列模板：[LM]-[LIVM]-T-E-[GAPQ]-x-[LIVMFYWHQ]-N-[PSTAQ]-x(2)-N-[KR](Rubenstein P.A.，BioEssays 12：309-315(1990))。肌动蛋白序列中最为高度保守的区域是支架结构的元件，而各家族成员的不同主要位于这些元件之间的环中。这些环是肌动蛋白结合蛋白的接触位点，因而肌动蛋白相关蛋白与不同系列的蛋白作用。

现在果蝇体内发现一种新的肌动蛋白相关蛋白基因13E，位于X染色体的13E区域中。多数肌动蛋白相关蛋白(ARPs)在上面提到的环中都有插入序列，这些插入的定位可用于把ARPs归为不同类型的同种型。新发现的13E蛋白最大的插入是在环中，位于丝状体中毗连的肌动蛋白亚基之间的接触面，因而这种新的ARPs不能聚合而只能形成同聚物或是与肌动蛋白以及其它的ARPs结合，它是一种母体负载的蛋白，在早期胚胎发育中起作用(Stewart Frankel，MatthewB.Heintzelman，J.Mol.Biol.(1994)235，1351-1356)。

本发明的新的人肌动蛋白相关蛋白13E与果蝇肌动蛋白相关蛋白13E在蛋白水平上有47％的同一性及69％的相似性，且具有肌动蛋白相关蛋白家族其他成员所共有的特征序列片段，并具有相似的生物学功能，因而被命名为人肌动蛋白相关蛋白13E-32。该蛋白可用于预防或改善血流或组织中与肌动蛋白相关的组织损伤，诊断或防治胸痛，心力衰竭，脓毒性休克等疾病。

由于如上所述人肌动蛋白相关蛋白13E-32蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人肌动蛋白相关蛋白13E-32蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人肌动蛋白相关蛋白13E-32蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人肌动蛋白相关蛋白13E-32以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人肌动蛋白相关蛋白13E-32的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人肌动蛋白相关蛋白13E-32的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人肌动蛋白相关蛋白13E-32的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人肌动蛋白相关蛋白13E-32的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人肌动蛋白相关蛋白13E-32的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人肌动蛋白相关蛋白13E-32异常相关的疾病的方法。