[发明专利]一种新的多肽——人钴氨素结合蛋白10.45和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人钴氨素结合蛋白10.45，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

维生素B12又称钴氨素，其作用是帮助红细胞的形成和再生，因此可以防止贫血。对糖类、脂肪和蛋白的代谢来说是必须的。另外还在保持神经系统的正常状态，促进少儿生长，钙质吸收中起作用。钴氨素缺乏会导致恶性贫血，缺乏食欲，儿童生长停顿，疲劳，大脑损伤，神经紧张，沮丧，脊柱退化和平衡感消失等。钴氨素还与阿尔兹海默氏症的发生相关。

在所有的高等真核生物，包括人类中，有三类蛋白与结合、运输钴氨素(VB12)有关。1、内在因子(Intrinsic factor，IF)。这是一个糖蛋白，在胃中表达，在一些物种中也在脾脏中表达。IF的作用是提高钴氨素在小肠中的吸收，这一过程是通过特异的受体介导的细胞内吞作用实现的。2、转钴氨素I(TC1)和转钴氨素II(TCII)。它们是非糖蛋白，主要在血浆中表达，作用是将钴氨素从血液中转移到细胞中。现在已经知道IF和TCII的缺乏会引起钴氨素的缺乏，导致巨成红细胞贫血症和神经系统的髓鞘剥离症。【Neurol.Scand.44(suppl.5)，1-36】3、Haptocorrin(cobalophilin)。Haptocorrin是一种糖蛋白，在大部分的分泌物中都有发现。它可以钴氨素和其衍生物结合，其功能与防止细胞摄入细菌产生的钴氨素类似物有关。这三类蛋白从进化上是相关的。在中心区域有一个高度保守的区域：[SN]-V-D-T-[GA]-A-[LIVM]-A-x-L-A-[LIVMF]-T-C

本发明的多肽的蛋白序列包含钴氨素结合蛋白的特征性保守序列，因此认为是一种新的钴氨素结合蛋白，具有类似的生物学功能，命名为人钴氨素结合蛋白10.45。

由于如上所述人钴氨素结合蛋白10.45蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人钴氨素结合蛋白10.45蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人钴氨素结合蛋白10.45蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人钴氨素结合蛋白10.45以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人钴氨素结合蛋白10.45的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人钴氨素结合蛋白10.45的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人钴氨素结合蛋白10.45的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人钴氨素结合蛋白10.45的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人钴氨素结合蛋白10.45的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人钴氨素结合蛋白10.45异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中363-650位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1491位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。

本发明还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人钴氨素结合蛋白10.45蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本发明的多肽。本发明还涉及用该方法获得的化合物。